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技術(shù)文章

HL10118.1細(xì)胞/組織溶酶體粗提分離試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

閱讀:1222          發(fā)布時(shí)間:2016-6-14

主要用途

        我公司細(xì)胞/組織溶酶體粗提分離試劑是一種旨在從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的溶酶體細(xì)胞器的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和培養(yǎng)細(xì)胞的溶酶體的制備。

注意事項(xiàng)

  • 本產(chǎn)品為10次(1克動(dòng)物組織或 108細(xì)胞)操作
  • 所有操作均須嚴(yán)格在4或以下?tīng)顟B(tài)進(jìn)行
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 操作時(shí),須無(wú)菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(Reagent B)分離液(Reagent E
  • 建議使用足夠的樣品量
  • 建議嚴(yán)格控制操作時(shí)間
  • 通常勻化次數(shù)為20至40下(或細(xì)胞顆粒群/組織塊狀消失為止)達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過(guò)顯微鏡觀察3微升勻漿物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加勻化次數(shù)
  • 通常孵育5分鐘(不宜超過(guò)5分鐘)達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過(guò)顯微鏡觀察3微升裂解物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加孵育時(shí)間和渦旋震蕩次數(shù)
  • 對(duì)于難以裂解的細(xì)胞,例如HeLa細(xì)胞,采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術(shù)處理
  • 通常1克動(dòng)物組織或 108細(xì)胞的溶酶體含量為300微克左右溶酶體蛋白

11. 如果需要獲得99%以上純度的溶酶體,使用細(xì)胞/組織高質(zhì)純化溶酶體分離試劑盒-10118.3 

  • 溶酶體標(biāo)志酶活性測(cè)定,建議使用通用型N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶NAG)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒0031.1和純化溶酶體酸性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒50318.3 
  • 溶酶體形態(tài)和功能染色,建議使用細(xì)胞溶酶體形態(tài)染色試劑盒10121和純化溶酶體功能中性紅檢測(cè)試劑盒10323 
  • 本公司提供系列溶酶體分析試劑產(chǎn)品
  • 如:
  • 細(xì)胞/組織活性溶酶體分離試劑盒
  • 細(xì)胞/組織高質(zhì)純化溶酶體分離試劑盒

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