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全面解讀：抗體選擇指南，值得珍藏
閱讀：1060 發(fā)布時(shí)間：2024-8-19避免同種系物種的一抗選擇
- 避免同種系干擾：在進(jìn)行小鼠樣本檢測(cè)時(shí)，應(yīng)避免使用小鼠或大鼠來(lái)源的一抗。
- 原因：防止二抗與樣本中的內(nèi)源性免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致背景信號(hào)過(guò)高。
稀有樣本種屬的抗體選擇策略
- 免疫原序列查詢：對(duì)于市面上難以找到驗(yàn)證過(guò)的抗體，如豬、牛等，可以通過(guò)查詢抗體的免疫原序列，并與待測(cè)蛋白進(jìn)行同源性分析。
- 同源性標(biāo)準(zhǔn)：若同源性超過(guò)90%，可以嘗試使用，但需注意，這種情況下，廠家通常不提供質(zhì)保。
- 同源性分析方法：詳見(jiàn)下方視頻教程。
- 商業(yè)機(jī)密問(wèn)題：對(duì)于某些品牌，如CST，免疫原序列可能屬于商業(yè)機(jī)密。此時(shí)，可以提供自己的蛋白序列，請(qǐng)求廠家專(zhuān)家?guī)椭治鐾葱圆⒔o出使用建議。
實(shí)驗(yàn)方法確認(rèn)
確認(rèn)抗體適用性
- 實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)注：檢查抗體說(shuō)明書(shū)上的實(shí)驗(yàn)方法（application），確保包含您計(jì)劃進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型。
- WB實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)便性：如果僅進(jìn)行Western Blot（WB），選擇在說(shuō)明書(shū)中標(biāo)注WB的抗體即可。
- 多實(shí)驗(yàn)方法選擇：建議選擇實(shí)驗(yàn)方法多樣的抗體，以便未來(lái)進(jìn)行其他類(lèi)型實(shí)驗(yàn)時(shí)無(wú)需重復(fù)購(gòu)買(mǎi)。
- 免疫組化（IHC）注意事項(xiàng)：若進(jìn)行IHC，需確認(rèn)樣本類(lèi)型（如石蠟切片、冰凍切片或細(xì)胞）是否已由廠家驗(yàn)證。未經(jīng)驗(yàn)證的樣本類(lèi)型通常不提供質(zhì)保。