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如何减少ELISA试剂盒实验中背景因素的影响？
阅读：1930 发布时间：2018-4-24ELISA试剂盒实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着
洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验
。在实验结束时，我们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景
噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。
洗涤很重要
洗涤步骤看似很无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)
残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非
特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。
封闭更关键
封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体
非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不
充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。
如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也
是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多
个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特
异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。
常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特
异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添
加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低特异结合，产生假阴性。另一
个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。
蛋白封闭液则有所不同，是*的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗
原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组
分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过，它的缺点在于能与
Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。
抗体浓度须优化
我们通?；醘ollow师兄师姐留下来的操作步骤，但是如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体
的量。记住，非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。
检测试剂要适量
另一点也很显而易见：切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致
高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景，那么也无需太担心，依次查看ELISA系统中的组分，
并排除可能存在的问题。悉心优化，相信很快就会有漂亮的结果。