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一、转染基础概念

细胞转染是将外源核酸（DNA/RNA）导入真核细胞的技术，分为瞬时转染（外源基因短期表达）和稳定转染（基因整合至基因组长期表达）两类。核心应用包括基因功能研究、蛋白表达及基因治疗开发。

二、常用转染方法对比

三、标准化操作流程（以脂质体法为例）

细胞准备：接种对数生长期细胞，密度达70%-90%汇合。

复合物制备：

无血清培养基稀释质粒DNA与转染试剂（如Lip2000）。

室温静置15分钟形成DNA-脂质体复合物。

转染执行：

移除原培养基，加入复合物轻摇混匀。

4-6小时后更换含血清完-全培养基。

结果检测：24-72小时通过荧光显微镜或Western Blot验证表达。

四、关键注意事项

血清干扰：转染阶段需使用无血清培养基（如Opti-MEM）。

细胞状态：优先选择传代次数少、活力>90%的细胞。

毒性控制：脂质体与DNA比例需预实验优化（推荐1:1至3:1）。