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疏水層析填料的方式運用

閱讀:1485      發(fā)布時間:2023-7-5
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  一、疏水層析是利用蛋白質(zhì)在高鹽條件下吸附在疏水層析介質(zhì)的疏水基團上,降低鹽濃度時,不同蛋白按疏水性從弱到強依次被洗脫,從而達到分離純化的目的。
 
  二、與親和層析、離子交換層析相比,疏水層析在分離過程中,分離介質(zhì)與蛋白質(zhì)分子之間的相互作用力較弱,蛋白質(zhì)在層析分離中不易發(fā)生分子結(jié)構(gòu)的激烈改變,不易喪失活性,因此其應用領(lǐng)域不斷擴大,分離介質(zhì)的種類也日益增多。
 
  三、方式:
 
  (1)pH的篩選,可以提高產(chǎn)物收率,pH值升高會減弱疏水作用,一般選擇維持生物大分子的生物活性的中性條件(pH6~8)。
 
  (2)疏水吸附作用隨著溫度的上升而增強,樣品和純化系統(tǒng)的溫度需保持一致,溫度對疏水層析的影響非常大。
 
  (3)一般為低鹽洗脫,或者需要更強的洗脫條件,可加入少量的有機溶劑或去垢劑。
 
  四、疏水層析也稱疏水作用層析(hydrophobicinteractionchromatographyHIC)。蛋白質(zhì)表面一般有疏水與親水基團,疏水層析是利用蛋白質(zhì)表面某一部分具有疏水性,與帶有疏水性的載體在高鹽濃度時結(jié)合。在洗脫時,將鹽濃度逐漸降低,因其疏水性不同而逐個地先后被洗脫而純化,可用于分離其它方法不易純化的蛋白質(zhì)。

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