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一文帶你了解鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體的制備過(guò)程

閱讀:1181      發(fā)布時(shí)間:2022-3-16
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  鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備,將具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群,從根本上解決了在抗體制備中長(zhǎng)期存在的特異性和可重復(fù)性問(wèn)題,可直接用于疾病的診斷、預(yù)防、治療以及免疫機(jī)制的研究。
 
  鼠抗赭曲霉毒素A單克隆抗體的制備過(guò)程:
 
  1、免疫動(dòng)物免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過(guò)程。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射??乖ㄟ^(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。
 
  2、細(xì)胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠,無(wú)菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞。
 
  3、選擇性培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。
 
  4、雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞,只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞,因此,必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。
 
  5、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備重要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。

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