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伏馬毒素免疫親和柱的試驗(yàn)原理及檢測步驟

閱讀:1943      發(fā)布時(shí)間:2020-3-17
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   伏馬毒素免疫親和柱適合于和HPLC或LC-MS結(jié)合使用,定量檢測FB1、FB2和FB3。適用于糧谷、飼料等樣本中的伏馬毒素凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測定
  伏馬毒素免疫親和柱適用范圍及性能:
  用于定量檢測谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的伏馬毒素(FB)時(shí)的樣品前處理。
  伏馬毒素免疫親和柱的試驗(yàn)原理:
  本產(chǎn)品凈化的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),伏馬毒素單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上,樣品中的伏馬毒素經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過,在免疫親和柱內(nèi),伏馬毒素與抗體結(jié)合,洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。后采用甲醇-乙酸洗脫伏馬毒素,然后進(jìn)行相關(guān)分析。
  伏馬毒素免疫親和柱的檢測步驟
  l.樣品制備
  將固體樣品按四分法縮分至1kg,全部用谷物粉碎機(jī)磨碎并磨細(xì)至粒度小于1mm,混勻分成2份作為試樣,分別裝入潔凈的容器內(nèi),密封,標(biāo)識(shí)后置于4℃下避光保存。玉米油樣品直接取2份作為試樣,分別裝入潔凈的容器內(nèi),密封,標(biāo)識(shí)后置于4℃下避光保存。
  2.試樣提取
  準(zhǔn)確稱取固體樣品5g(精確至0.01g)于50mL離心管中,加入20mL乙腈-水溶液(50+50),渦旋或振蕩提取20min,取出后,在4000r/min下離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中。玉米油樣品操作同固體樣品,提取液在下層。
  3.試樣凈化
  取2mL提取液,加入47mL吐溫-20/PBS溶液,混合均勻后過免疫親和柱,流速控制在1~3mL/min,用10mLPBS緩沖液淋洗免疫親和柱,分別用1mL甲醇-乙酸溶液(98+2)洗脫免疫親和柱三次,收集洗脫液,55℃下氮吹至干,加入1mL乙腈-水溶液(20+80)溶解殘?jiān)u旋30s,過0.45um微孔濾膜后,收集于進(jìn)樣瓶中,待測。
  以上便是今天關(guān)于伏馬毒素免疫親和柱的試驗(yàn)原理及檢測步驟的全部分享了,希望對(duì)大家今后使用本設(shè)備能有幫助。
 

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