相称显微镜是做什么的?
阅读:608 发布时间:2019-6-19
相称显微镜是一种增加对比度的方法??梢栽诓蝗旧那榭鱿驴吹交钐逑赴?。
相称显微镜,又叫相差显微镜(Phase contrast microscopy )。相差是一种增加对比度的方法,可以在不染色的情况下看到活体细胞。
相称显微镜是一种利用光的衍射和干涉现象将透过标本的光线光程差或相位差转换成肉眼可分辨的振幅差显微镜。提高了密度不同物质图像的明暗区别,可用于观察未经染色的细胞结构。
位相差显微镜的原理为何?如何调整?
相差成像
人的眼睛能够识别明与暗之差(光的强度)和颜色不同(光的波长不同),但难以识别差别小的无色的透明物体。
光对无色透明物体(相位物体)并不引起明、暗和颜色的变化,而只产生所谓的相位差??墒钦庵窒辔徊畈荒苡萌庋凼侗?,也就看不见这种相位物体了。
相差显微镜利用阿贝成像原理,把相位资讯转化为振幅资讯,是观察透明物体的关键。
光路原理
相差光路重要两个元件是环形光阑和相位板
环形光阑:不同的环状孔形成的光阑,它们的直径和孔宽是与不同的物镜相匹配的。由于透明圆环所成的像恰好落在物镜后焦点平面和相板上的共轭面重合。因此,未发生偏斜的直射光便通过共轭面。其作用是将直射光所形成的像从一些衍射旁像中分出来。
相位板:安装在物镜的后焦面处,相板装有吸收光线的吸收膜和推迟相位的相位膜。它除能推迟直射光线或衍射光的相位以外,还有吸收光使亮度发生变化的作用。
利用位相差聚光镜及内部位相环所构成的环状光圈,产生中空光锥通过聚光镜、穿过检体,经过物镜内的光延迟位环板而成,因检体折射指数不同,造成绕射光束与直射光束发生干涉作用,得到明暗对比的效果。调整位相差装置,先选择聚光镜上与物镜相同倍率之位相差环,所形成的亮环与物镜内的暗环配合,调整聚光镜上亮环,使之重叠即可。
位相称显微镜应用
主要提供胚胎形态的观察、胚胎级数的判别等特殊功用。解剖显微镜,提供睾丸取精之后,切取组织搜寻精子或采卵时搜寻卵子,因此临床应用于:
●观察卵子及胚胎的发育情形。
●辅助胚胎植入前诊断之细胞核固定。
●精虫显微注射之应用操作。
●胚胎辅助孵化之应用操作。
相称显微镜的优势:
我们一般用普通显微镜观察试样的显微镜组织,是靠试样表面反射光的强弱(即黑白灰度的不同)来鉴别它。
有的显微镜组织由于其反射率和吸收率的不同而产生不同的灰度。反射率较大者,则组织较明亮:反射率较小者,组织比较灰暗。
当试样上两相的反射系数相同,仅有因轻微侵蚀或各相硬度不同而使抛光时形成微小凹凸,或者有塑料性变形及第二类共格差别。
对此一般生物显微镜明场就不易鉴别,当表面高低起伏极小时,更难辨别,而相称技术成功地解决了这一问题。一般表面高低差在100~1500Ao(1Ao=0.1NM)范围内均能用相称显微镜来观察。