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大鼠軟骨寡聚蛋白COMP Elisa試劑盒

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所  在  地:上海市

更新時間:2024-08-10 12:13:24瀏覽次數(shù):1228

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大鼠軟骨寡聚蛋白COMP Elisa試劑盒
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大鼠軟骨寡聚蛋白COMP Elisa試劑盒


實驗原理

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 COMP 單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 COMP與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠COMP,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,zui后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,COMP濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中COMP濃度。

試劑盒組成(2-8℃保存)

酶標(biāo)板(Coated Wells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate)

12ml

10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer)12ml20×濃縮洗滌液(Wash Buffer)

50ml

標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):1000ng/瓶2瓶底物工作液(TMB Solution)

12ml

*抗體工作液(Biotinylated Antibody)12ml終止液(Stop Solution)

12ml

大鼠軟骨寡聚蛋白COMP Elisa試劑盒

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復(fù)凍融。血清、血漿至少作1:2稀釋(取50ul,加標(biāo)本稀釋液50ul,稀釋2倍)。細胞上清至少10倍稀釋。

2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成1000ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,*管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在*管中加入1000ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。

3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)


檢測程序

1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。

2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。

3.每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。

4.洗板:同前。

5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。

6.洗板:同前。

7.每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。

8.每孔加入100ul終止液混勻。

9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。


結(jié)果計算與判斷

1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。

2.以標(biāo)準(zhǔn)品100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0 ng/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)COMP含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。

試劑盒性能

1.靈敏度:zui小的COMP 檢測濃度小于0.8ng/ml。

2.特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠COMP。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應(yīng)。

3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.6%。

注意事項

 1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高。

 3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。

 4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

 5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

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