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Caco2結(jié)腸癌細(xì)胞系(株)傳代基本技術(shù)

時間:2013-1-28閱讀:3008

Caco2結(jié)腸癌細(xì)胞系(株)傳代基本技術(shù)

1. 選用細(xì)胞生長狀態(tài)好(80-90%),生長數(shù)量大于5×105 的細(xì)胞進(jìn)行傳代。

2. 吸除細(xì)胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS(pH7.4)清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶2 次。加入1ml 消化液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶,輕輕搖動,使細(xì)胞消化液剛剛覆蓋細(xì)胞表面。注:消化液配比為:0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA。

4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)分鐘后,在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化狀態(tài)。

注意:若貼壁細(xì)胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后,即可用手指輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶側(cè)部或底部使大部分貼壁細(xì)胞脫落,之后立即加入細(xì)胞終止液,終止細(xì)胞消化。每種細(xì)胞的消化時間有差異,消化時注意觀察,不要消化太久。

5. 吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細(xì)胞若干次,吸出細(xì)胞懸浮液,轉(zhuǎn)入15ml 離心管中,

1000rpm 離心5 分鐘。

6. 棄離心管中上清液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。細(xì)胞計數(shù),確定細(xì)胞數(shù)量。

7. 細(xì)胞分瓶后,加入適量細(xì)胞培養(yǎng)液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,置于5%CO2、95%空氣、37℃ 培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24 小時。

 

來源:慧穎生物實(shí)驗(yàn)室

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