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上?;鄯f生物科技有限公司

CTLL-2細胞|CTLL-2細胞株 培養(yǎng)說明

時間:2016-12-21閱讀:5869

CTLL-2細胞|CTLL-2細胞株 培養(yǎng)說明

一、細胞培養(yǎng)條件

產品名稱:CTLL-2細胞

中文名稱:小鼠T淋巴細胞

生產特性:懸浮生長

培養(yǎng)條件:RPMI1640+100U/ml(重組白介素-2)+10% FBS

傳代方法:1:2

傳代情況:2-3天換液/傳代

凍存條件:90% FBS+10%DMSO

支原體檢測:陰性

產品供應商:上?;鄯f生物科技有限公司

細胞株|細胞系|ATCC細胞|傳代細胞|貼壁細胞|懸浮細胞 盡在慧穎生物

二、細胞收到后處理

 

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml*培養(yǎng)液,懸浮細胞需離心處理,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

 

三、細胞培養(yǎng)步驟

 

  1. 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)夜(或將細胞懸液加入6cm皿中,加入約6ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
  2. 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

 

1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)液終止消化。

3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

 

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 

3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心5分鐘,去除上清,按凍存數量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

 

注意

我細胞庫認為購買細胞的客戶有培養(yǎng)細胞的經驗,客戶收到細胞后,嚴格按照本細胞培養(yǎng)條件更換*培養(yǎng)基。(細胞庫推薦使用的培養(yǎng)基,我?guī)焓褂玫呐囵B(yǎng)基為Gibco,血清SERANA或Gemini,雙抗Gibco,胰酶Gibco)

如果因為客戶缺少基本的細胞培養(yǎng)知識或培養(yǎng)條件而導致細胞各類問題,我?guī)旄挪回撠?。對于因缺少細胞培養(yǎng)知識和時間,建議客戶可我細胞庫代為培養(yǎng)細胞和后續(xù)相關實驗。

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