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精子活力測(cè)定方法

時(shí)間:2017/5/16閱讀:2838

以過(guò)濾海水(水溫15℃、pH8.1、鹽度27%)為激活液(下同),精液與激活液混合后在顯微鏡下觀察精子活力(激活率、活動(dòng)時(shí)間和壽命)。激活率為給定視野中被激活精子的數(shù)量占全部精子數(shù)量的百分比;運(yùn)動(dòng)時(shí)間是指精子自激活開始至90%的精子原地顫動(dòng)為止所經(jīng)歷的時(shí)間;精子的壽命指精子從激活開始至90%的精子停止運(yùn)動(dòng)的時(shí)間。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
稀釋液種類對(duì)精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗(yàn)分別以HBSS、MPRS、Cortland液為稀釋液(如表一),以10%EG為抗凍劑(抗凍劑為終濃度,下同)配制抗凍液;將精液與抗凍液按1︰3比例混勻,4℃平衡30min;將平衡后的精液-抗凍液混合物分裝入0.25mL麥細(xì)管中,然后用兩步降溫法(即將盛精麥細(xì)管平放在自制簡(jiǎn)易降溫裝置的液氮面上7.5cm處,停留10min后投入液氮中)保存。12h后,將麥細(xì)管從液氮中快速取出,于40℃水浴中溶化后檢測(cè)精子激活率。

稀釋比例對(duì)精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗(yàn)以10%EG為抗凍劑、Cortland液為稀釋液配制抗凍液,將精液與抗凍液按1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:7、1:9混勻,按前文方法冷凍保存精子及解凍與激活率檢測(cè)。
抗凍劑種類及濃度對(duì)精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗(yàn)以5%、10%、15%及20%四個(gè)濃度的DMSO、Gly、EG、PG為抗凍劑、Cortland液為稀釋液配制抗凍液,將精液與抗凍液按1︰3混勻,然后冷凍保存精子及解凍與活力檢測(cè)。

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