化工仪器网
技术文章
竞争法ELISA试剂盒的特性及其检测步骤
阅读：91 发布时间：2025-6-24当目标分析物太小而不能用两种抗体有效地夹住时，可采用竞争性法ELISA。竞争法ELISA适用于确定小分子的浓度，如前列腺素、cAMP、一氧化氮、皮质醇等。
该法也是将捕获抗体包被在微孔板上。与夹心法ELISA不同的是，该法不使用标记的检测抗体，而是使用标记的抗原。标记的抗原可与样本中的目标抗原竞争性结合捕获抗体。样品中存在的抗原越多，能够与捕获抗体结合的标记抗原就越少。加入底物并产生信号，信号值与样品中存在的蛋白量成反比。
竞争法ELISA虽然适用于小分子抗原的检测，但它也存在一些缺点：
1. 灵敏度相对较低：相比双抗体夹心法，竞争法的灵敏度通常较低。这是因为信号强度与待测抗原浓度呈负相关，低浓度抗原的信号变化可能不容易被检测到。
2. 标准曲线范围较窄：竞争法的标准曲线通常呈S形，线性范围较窄，需要仔细优化实验条件才能获得准确的结果。
3. 操作较为复杂：竞争法的操作步骤相对较为复杂，需要精确控制抗原、抗体和标记物的浓度，以及孵育时间和洗涤条件。
4. 容易受到干扰：竞争法容易受到样本中其他物质的干扰，如类风湿因子、交叉反应物质等，这些物质可能会影响抗原-抗体结合，导致结果偏差。因此，需要进行适当的质控和验证，以确保结果的可靠性。
竞争法ELISA试剂盒的检测步骤：
1. 包被抗体固定：首先，将捕获抗体固定在微孔板上，这种抗体能特异性地结合待测抗原。
2. 加入样品和标记抗原：在每个微孔中加入待测样品和已知浓度的酶标抗原的混合液。
3. 孵育：让样品中的抗原与固相捕获抗体结合，同时酶标抗原也在竞争结合这些位点。
4. 洗涤：去除未结合的抗原和酶标抗原，以减少背景信号。
5. 加入酶标二抗（如果适用）：在一些竞争法中，可能需要加入酶标二抗来检测结合的酶标抗原。
6. 第二次洗涤：进一步清除未结合的酶标二抗，保持高特异性。
7. 显色底物：加入酶的底物，形成颜色变化或荧光信号。
8. 读取结果：通过酶标仪在特定波长下读取吸光度值，通常在450nm。样品中待测抗原的浓度与信号强度呈反比。
9. 建立标准曲线：使用已知浓度的标本建立标准曲线，以量化样品中的待测抗原。
通过这些步骤，竞争法ELISA可以有效地区分样品中抗原的浓度，即使在复杂或低纯度的样本中也能得到可靠的定量结果。