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上海宝叶生物科技有限公司
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[方法]
1．将大肠杆菌TG1种到基本培养琼脂板，37℃过夜。
2．将基本培养琼脂板上的大肠杆菌TGl再接种到含有15m1 2XTY培养基的100ml形瓶中。37℃振荡培养过夜。
3．用5ml夜培养的TGl接种到两个含500m1 2×Y培养基的2L有挡板锥形瓶中。在摇床中培养约1．5小时，直到A600接近0．5。
4．将菌液转移4个预冷离心瓶中（约250ml/瓶）。平衡后，置于冰上20分钟。
5．以3000g，4℃离心15分钟。使用前预冷所有转头。
6，弃去上清，并以起始体积的冰冷lmmol/L Hepes溶液（约250m1）重悬每个锥形瓶中的细胞。所有溶液都应当新鲜配置。
7．再次以3000g，4℃离心15分钟。
8．以一半起始体积的冰冷lmmol/L Hepes溶液（约125ml）重悬每个锥形瓶中的细胞；此时可合并到两个离心瓶中。
9．再次以3000g，4℃离心15分钟。
10．以总体积为20m1的10%甘油和lmm01/L Hepes混合液重悬所有细胞。
11．再次以3000g，4℃离心15分钟。
12．如果细胞不是新鲜使用而是储存，则需准备乙醇/干冰浴。
13．以总体积为2m1的10%甘油重悬细胞。
14．使用新鲜制备的细胞，或者用干冰浴等量分装冻存细胞②。在检测效率后，及时使用细胞（在1周内）。
用于电转化的DNA不得含有盐分。细菌/DNA混合物中如有盐分可导致电?。ㄒ恢侄搪罚┑男纬?，应加以避免。总体上，在70℃10分钟的热灭活步骤后，可使用2/Il标准连接液进行连接。为构建抗体文库，所用DNA必须使用酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀法或选择合适的试剂盒（例如Geneclean或Qiagen）进行纯化。
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