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连接scFv和载体DNA并转化大肠杆菌,构建scFv突变文库

2013-1-14  阅读(1402)

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[方法]
1.配制1个50ul连接混合液,包含:
● 10×连接缓冲液,5uI
● 水,16ul
● NcoI和NotI消化的pHENl(100g/ul), 20ul
● VcoI和NotI消化的scFv文库(100g/ul), 7ul
● T4 DNA连接酶(400U/ul),2ul
2.16℃孵育反应液过夜。
3.乙醇沉淀DNA并用70%乙醇洗涤沉淀1次。
4.重悬DNA于10ul水中。
5.用4份相同的2.5ul的DNA分别电转化到电感受态大肠杆菌TGl细胞中。
6.确定文库容量,并将菌文库材抖储存于-70℃。

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