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上海宝叶生物科技有限公司
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将抗原结合到抗体微珠基质上的zui简单方法是将微珠装到一个层析柱内，将抗原溶液流经层析柱，当抗原流经层析柱时结合到抗体上而被固定，直到洗脱时才洗脱下来。这种方法的效率是根据抗原与固定的抗体之间的接触时间决定的，所以抗原抗体之间的作用时间可以用低流速而延长。
这种方法zui大一个问题就是某些蛋白非特异性结合到分离柱上，这些蛋白可以出现在洗脱液中，从而使纯化效率降低?；时旧砗涂固寤矢春衔锞哂杏氪炜乖芤褐械鞍字史翘匾煨越岷系谋砻婊钚?。虽然这些反应较正常的抗原—抗体反应要弱得多，但抗原溶液中如存在大量额外的非特异性蛋白即意味着在此过程中将产生内在的高本底。为了尽可能减少非特异性吸附，可以采取以下几种措施。
首先，如采用各种亲和柱纯化法，所用基质的量须调整到略高于其饱和水平。保持抗体—微珠—基质的体积，使非特异性本底尽可能降低。捕获大量抗原所需抗体—微珠基质的量与流速有关。流速较慢时，柱容量更有效，因为偶联的抗体就有更多时间与抗原结合。
第二种方案是降低柱上的非特异性吸附量。许多吸附到柱基质上的蛋白质是部分或全部变性的蛋白。当制备抗原溶液时，机械性压力应尽可能小，并避免过度与空气接触。降低抗体柱上非特异结合的一种较好的方法是将抗原溶液通过一个未与抗体偶联的琼脂糖柱，此层析柱应与抗体—微珠基质柱体积相同或更大。另外一种引起非特异性结合的因素来自小颗粒碎片被阻留在柱基质上。将抗原溶液经过100 000g离心30min，可以去除制品中大多数较大的凝聚物。
第三种降低本底的方法是用缓冲液洗涤层析柱以去除非特异性蛋白。任何不干扰抗原抗体反应的缓冲液都可以用于阻止非特异性结合。
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