inventbiotech Minute™ 动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒

英文特生物技术（北京）有限公司成立于2016年，是美国英文特生物技术股份有限公司（Invent Biotechnologies, Inc.）在华子公司。作为应用离心管柱滤器快速提取蛋白及亚细胞结构分离的先驱，英文特公司成功研发出五十多个生命科学研究领域蛋白提取产品，其中具有多个特色产品，使原有的溶液法升级为柱式提取法，为蛋白提取分离带来了新方案。全线产品均具有快捷，易用，产量高及重复性好的特性。在短短几年中，产品以稳定的品质获得了世界各国越来越多的科研机构和科研者的青睐。英文特公司继续致力于蛋白提取及纯化，亚细胞结构分离，蛋白组学以及蛋白间相互作用的产品开发及应用，为生命科学领域的科研者提供便捷的研究方法和产品。

产品名称：Minute™ 动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒 SD-001/SN-002

Minute™ Total Protein Extraction Kit for Animal Cultured Cells/Tissues

产品描述：

动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒，由优化细胞裂解液和0.6ml离心管柱组成，能够迅速从动物细胞和组织(无脊椎动物和脊椎动物)中提取总蛋白，用于蛋白质分析和进一步纯化。试剂盒同时提供天然和变性两种不同的裂解液，可供用户根据不同下游实验进行选择。离心管柱技术提取蛋白质，样品量最小可处理20ul，最大可达500ul。从细胞/组织中提取总蛋白质仅需1-8分钟，得率可达2-8mg/ml。

应用：

可应用于 SDS-PAGE, 免疫印迹, IP, ELISA，酶检测及其他应用。这个试剂盒提供了更快的总蛋白提取方法。

提取的的蛋白可以用于小型色谱纯化柱纯化蛋白的原料使用。

试剂盒组分

50 Preps: 4 Preps：

1. 25ml 变性细胞裂解液（SD-001） 1. 2.0ml 变性细胞裂解液（SD-001）

2. 25ml 天然细胞裂解液（SN-002） 2. 2.0ml 天然细胞裂解液（SN-002）

3. 50 个离心管柱 3. 4 个离心管柱

4. 50 个收集管 4. 4 个收集管

5. 2 根塑料研磨棒 5. 1 根塑料研磨棒

**注:试剂盒中的细胞裂解液不含任何还原剂和伯胺。

运输储存：常温运输，室温保存。

重要产品信息

1. Minute TM总蛋白提取试剂盒是一款快速总蛋白提取试剂盒。蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游

实验需要较长时间或者蛋白提取后需要保存较长时间，建议添加蛋白酶抑制剂。研究蛋白磷酸化，磷酸

酶抑制剂应在使用前加入裂解液中。（各类抑制剂的添加方法请按照抑制剂母液比例，例如母液是

100X，添加时按照 1：100 添加，即 1ml 裂解液中添加 10ul 抑制剂）。推荐使用 BCA 试剂盒用于

蛋白浓度测定。

2. 裂解液的使用要根据下游实验来选择，变性裂解液（SD-001）适合用于 SDS-PAGE，WB 实验，天然裂

解液（SN-002）适合用于 ELISA，IP，CO-IP 等实验。

3. 使用SD-001变性裂解液提取的蛋白和使用SN-002天然裂解液提取的蛋白，做WB上样前，仍需加Loading 

buffer 混匀煮沸样品后上样。

4. 如果变性裂解液在低温情况下出现沉淀，在 37 度以上孵育至沉淀复溶可正常使用。

所需附加材料

1 X PBS

涡旋震荡仪

台式离心机

BCA 蛋白定量试剂盒

操作方法：

细胞样品总蛋白提取

变性总蛋白提取（SD-001）SDS-PAGE，WB 实验适用

A．非贴壁细胞

1.将离心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成为套管放置于冰上预冷。

2.低速离心收集细胞，在离心管中加入预冷的 PBS，500Xg 离心 2-3 分钟清洗细胞。弃去上清，剩余与细胞体

积相同体积的 PBS。涡旋震荡重悬细胞。

3.加入表格 1 中相应体积的细胞裂解液（SD-001），涡旋震荡裂解细胞。（细胞数量和裂解液须保证对应关系，

以达到最佳提取效率）

请注意：部分未wan全裂解的细胞不会影响样品质量。

4.将细胞裂解物转移到预冷的离心管柱套管中，盖上盖子，14,000-16,000Xg 离心 30 秒取出。

5. 弃去离心管柱，收集管中即是蛋白样品，可应用于下游实验。

B．贴壁细胞

1. 将离心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成为套管放置于冰上预冷。

2. 贴壁细胞生长至 90-100%融合时，将预冷的 PBS 直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗一次，wan全吸

出上清。

3.按照表 2 中将相应体积的细胞裂解液（SD-001）均匀的加入整个器皿表面，用移液器反复吹打几次以裂解

细胞，将细胞裂解物迅速转移到预冷的离心管柱套管中，盖上盖子，14,000-16,000Xg 离心 30 秒取出。（如提

取浓度不佳，可减少裂解液使用量）

4. 弃去离心管柱，收集管中即是蛋白样品，可应用于下游实验。

天然总蛋白提取（SN-002）ELISA，IP，CO-IP，酶活性检测等实验适用

A．非贴壁细胞

1. 将离心管柱（filter cartridges）套入接收管中成为套管，与天然细胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上预冷。

2. 低速离心收集细胞，在离心管中加入预冷的 PBS 清洗细胞一次，500Xg 离心 2-3 分钟沉淀细胞。弃去上清，

在管中保留与细胞体积相同体积的 PBS。旋窝震荡重悬细胞。

3. 加入表格 3 中相应体积的细胞裂解液，涡旋震荡裂解细胞 15 秒。将离心管放置于冰上 3-5 分钟然后涡旋震

荡 10 秒。（细胞数量和裂解液须保证对应关系，以达到最佳提取效率）

4. 将细胞裂解物转移到预冷的离心管柱套管中，盖上盖子，14,000-16,000Xg 离心 30 秒取出。

5. 弃去离心管柱，收集管中即是蛋白样品，可应用于下游实验。

B．贴壁细胞

1. 将离心管柱（filter cartridges）套入接收管中成为套管，与天然细胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上预冷。

2. 贴壁细胞生长至 90-100%融合时，用预冷的 PBS 清洗细胞两次，wan全吸出上清。

3. 按照表 4 中将相应体积的细胞裂解液均匀的加入整个器皿表面，放置于冰上孵育 5 分钟，用移液器反复吹

打以裂解细胞，将细胞裂解物转移到预冷的离心管柱套管中，盖上盖子，14,000-16,000Xg 离心 30 秒取出。（如

提取浓度不佳，可减少裂解液使用量）

4. 弃去离心管柱，收集管中即是蛋白样品，可应用于下游实验。

动物组织总蛋白提取

变性总蛋白提取（SD-001）SDS-PAGE，WB 实验适用

以下步骤是从 15-20mg 动物组织中提取，对于不同的样品起始量，需按比例调整裂解液的用量。

1. 将离心管柱（filter cartridges）套入接收管中，成为套管放置于冰上预冷。

2. 将 15-20mg 新鲜/冷冻组织放置于离心管柱套管上，用塑料研磨棒向下按压反复扭转研磨 50-60 次，加入200ul 变性细胞裂解液（SD-001），继续研磨 30-60 次。（组织用量不要过量，无需过度研磨，裂解液可分两次

加入以得到最佳效果）注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻di冲洗干净，用纸巾擦干。

3. 盖上盖子，室温孵育 1-2 分钟，14,000-16,000Xg 离心 1-2 分钟。

4. 弃去离心管柱，收集管中即是蛋白样品，可应用于下游实验。

请注意：部分未wan全裂解的组织不会影响样品质量。

天然总蛋白提取（SN-002）ELISA，IP，CO-IP，酶活性检测等实验适用

1. 将离心管柱（filter cartridges）套入接收管中成为套管，与天然细胞裂解液（SN-002）共同放置于冰上预冷。

2. 将 15-20mg 新鲜/冷冻组织放置于离心管柱上，用塑料研磨棒向下按压反复扭转研磨 50-60 次，加入 200ul

天然细胞裂解液（SN-002），继续研磨 30-60 次。（组织用量不要过量，无需过度研磨，裂解液可分两次加入

以得到最佳效果）。注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻di冲洗干净，用纸巾擦干。

3. 开盖冰上孵育 5 分钟，盖上盖子，4℃，14,000-16,000Xg 离心 1-2 分钟。

4. 弃去离心管柱，收集管中即是蛋白样品，可应用于下游实验

常见问题