Bridge It SAM检测试剂盒介绍

Mediomics Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）荧光分析试剂盒

分析性能

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简单：混合和测量

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快速：培养30分钟后读取荧光信号

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灵敏度：分析在0.5µM的灵敏度下限下测量SAM

（即96孔中50 pmol/孔或384孔中20 pmol/孔）

微孔板）

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灵活：在FRET（Bridge It®）和TR-FRET（TR）中都可以进行分析-

FRET Bridge It®）格式

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高信号背景比：Bridge It®分析试剂盒的TR-FRET选项提供了非常高的信号背景比（>30倍），这对于高通量筛选和药物发现非常有用

*Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）荧光分析试剂盒仅用于实验室研究和开发（研发）目的。本产品未经政府监管部门批准用于人类或动物疾病的诊断或治疗、食品监测或实验室研发以外的任何应用，不得用于此类目的。

S-腺苷甲硫氨酸（也称为SAM，SAMe或AdoMet）在所有类型生物体的甲基化生物过程中起着至关重要的作用。在甲基化循环中，SAM充当DNA和蛋白质共价修饰中使用的甲基基团的供体。SAM水平的可变性与衰老过程、许多神经和精神疾?。òò⒍暮Ｄ?、抑郁症、HIV相关疾?。┯泄?/span>

神经功能障碍/痴呆、多发性硬化、帕金森病、脊髓变性、癫痫、纤维肌痛、偏头痛，以及慢性肝功能障碍、动脉硬化和癌症。目前，使用高压液相色谱法（HPLC）对SAM进行定量。高效液相色谱法耗时、成本高，而且由于需要大量有机溶剂，对环境不友好。

所有序列特异性DNA结合蛋白的共同特性是，它们能够以高亲和力和特异性结合到包含*核苷酸序列的DNA双链，即蛋白质的DNA结合位点。Mediomics的新型分析平台设计依赖于这一共同特征。包含给定目标DNA结合蛋白的序列特异性DNA结合位点的DNA双链体被拆分为两个DNA“半位点"双链体，每个双链体具有短的单链上臂。这些单链延伸足够短，因此在缺乏靶蛋白的情况下几乎不会发生自发的r-e结合。

然而，当存在靶蛋白时，其对全长DNA序列的高亲和力将驱动两个半位点DNA双链体的重新结合。这种重新关联可以通过合并适当的

荧光探针进入两个DNA半位点中的每一个。DNA结合蛋白的存在被检测为荧光信号的增加。如下图所示，这种基本平台设计的简单变体允许DNA结合蛋白（黄色卵形）作为其特定配体的敏感生物传感器发挥作用：

真核细胞大约含有3000个序列特异性DNA结合蛋白。这些重要的蛋白质在有或没有特定小分子协同调节器（配体）的情况下发挥作用，控制基因组DNA活动的各个方面，包括基因表达、DNA复制和DNA修复。Mediomics正在应用其新型荧光分析平台开发体外分析，用于快速、灵敏地定量DNA结合蛋白及其小分子配体的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一种小分子配体，与甲硫氨酸阻遏蛋白结合并共同调节其活性。

Mediomics Bridge It®SAM荧光分析方法基于成熟的荧光测量技术和

利用DNA结合蛋白作为生物传感器的新分析平台设计

对于各自的小分子co调节器（配体）。DNA序列特异性甲硫氨酸再吸收蛋白对其*DNA的亲和力

其配体S腺苷甲硫氨酸的存在大大增加了结合位点。在本试验中，MetJ共有序列分为两部分

大约相等的DNA“半位点"，其中一半片段用荧光素标记，另一半片段用Oyster®645荧光团标记。

试样中SAM的相对含量会影响其含量

DNA MetJ蛋白复合物形成的检测。当这个复杂

形式，它使荧光标记的DNA半位点非常接近，并导致荧光信号发射的可测量变化（增加），可使用微孔板读取器轻松测量（波长设置：

吸收485 nm；发射665 nm）。然后使用SAM标准曲线确定测试样品中的SAM浓度。

Bridge It®SAM荧光分析方法具有非常理想的性能特征，包括高（>6:1）信号背景比、良好的检测范围（~ 0.4μM–100μM）和~ 0.4μM的检测灵敏度。该检测水平（~ 0.4μM）有助于在大多数感兴趣的测试样本（包括生物流体）中量化SAM，细胞培养和发酵培养基，以及组织和细胞提取物。该测定可以修改为任何使用SAM作为反应物或产物的酶反应的测定。

Mediomics分析的平板阅读器设置

对于基于TR-FRET的分析（TR-FRET Bridge It®和TRF-PINCER®）：

330 nm激励滤波器（带宽：80 nm）

665 nm发射滤波器（带宽：7.5 nm）

620 nm发射滤波器（带宽：40 nm）

应从顶部读取铭牌。建议的读取设置为每个数据点50次测量，收集数据前的延迟时间为55μs，数据收集时间为1000μs。

对于基于FRET的分析（Bridge It®和FRET-PINCER®）：

485 nm激励滤波器（带宽：20 nm）

665 nm发射滤波器（带宽：34 nm）

540 nm发射滤波器（带宽：40 nm）

应从顶部读取铭牌。建议读取设置为每个数据点50个测量值。