Mediomics’Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）荧光分析说明书

介绍

*Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）荧光分析试剂盒仅用于实验室研究和开发（研发）目的。本产品未经政府监管部门批准用于人类或动物疾病的诊断或治疗、食品监测或实验室研发以外的任何应用，不得用于此类目的。

S-腺苷甲硫氨酸（也称为SAM，SAMe或AdoMet）在所有类型生物体的甲基化生物过程中起着至关重要的作用。在甲基化循环中，SAM充当DNA和蛋白质共价修饰中使用的甲基基团的供体。SAM水平的可变性与衰老过程、许多神经和精神疾?。òò⒍暮Ｄ?、抑郁症、HIV相关疾?。┯泄?/span>

神经功能障碍/痴呆、多发性硬化、帕金森病、脊髓变性、癫痫、纤维肌痛、偏头痛，以及慢性肝功能障碍、动脉硬化和癌症。目前，使用高压液相色谱法（HPLC）对SAM进行定量。高效液相色谱法耗时、成本高，而且由于需要大量有机溶剂，对环境不友好。

所有序列特异性DNA结合蛋白的共同特性是，它们能够以高亲和力和特异性结合到包含*核苷酸序列的DNA双链，即蛋白质的DNA结合位点。Mediomics的新型分析平台设计依赖于这一共同特征。包含给定目标DNA结合蛋白的序列特异性DNA结合位点的DNA双链体被拆分为两个DNA“半位点"双链体，每个双链体具有短的单链上臂。这些单链延伸足够短，因此在缺乏靶蛋白的情况下几乎不会发生自发的重新结合。

然而，当存在靶蛋白时，其对全长DNA序列的高亲和力将驱动两个半位点DNA双链体的重新结合。通过在两个DNA半位点中的每一个结合适当的荧光探针，可以灵敏地检测到这种重新结合。DNA结合蛋白的存在被检测为荧光信号的增加。如下图所示，这种基本平台设计的简单变体允许DNA结合蛋白（黄色卵形）作为其特定配体的敏感生物传感器发挥作用：

真核细胞大约含有3000个序列特异性DNA结合蛋白。这些重要的蛋白质在有或没有特定小分子协同调节器（配体）的情况下发挥作用，控制基因组DNA活动的各个方面，包括基因表达、DNA复制和DNA修复。Mediomics正在应用其新型荧光分析平台开发体外分析，用于快速、灵敏地定量DNA结合蛋白及其小分子配体的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一种小分子配体，与甲硫氨酸阻遏蛋白结合并共同调节其活性。

Mediomics Bridge It®SAM荧光分析方法基于成熟的荧光测量技术和新的分析平台设计的组合，该平台利用DNA结合蛋白作为其各自小分子co调节器（配体）的生物传感器。DNA序列特异性MetJ甲硫氨酸阻遏蛋白对其*DNA结合位点的亲和力在其配体S腺苷甲硫氨酸存在下大大增加。在本试验中，MetJ共有序列分为两部分

大约相等的DNA“半位点"，其中一半片段用荧光素标记，另一半片段用Oyster®645荧光团标记。测试样本中SAM的相对含量将影响分析中DNA-MetJ蛋白复合物的形成量。当这种复合物形成时，它使荧光标记的DNA半位点非常接近，并引起荧光信号发射的可测量变化（增加），可使用微孔板读取器轻松测量（波长设置：

吸收485 nm；发射665 nm）。然后使用SAM标准曲线确定测试样品中的SAM浓度。

Bridge It®SAM荧光分析方法具有非常理想的性能特征，包括高（>6:1）信号背景比、良好的检测范围（~ 0.4μM–100μM）和~ 0.4μM的检测灵敏度。该检测水平（~ 0.4μM）有助于在大多数感兴趣的测试样本（包括生物流体）中量化SAM，细胞培养和发酵培养基，以及组织和细胞提取物。该测定可以修改为任何使用SAM作为反应物或产物的酶反应的测定。

分析试剂盒中包含的试剂量足以使用黑色384孔非结合表面微孔板执行数量的单个SAM测量。将SAM分析溶液储存在-80°C下直至使用，在该温度下其活性可保持长达1年。如果-80°C冷冻柜不可用，则将SAM分析溶液储存在-20°C下，直到使用为止，其活性将保持长达6个月。Bridge It®SAM荧光分析试剂盒的其余部分可在-20oC下储存在冰箱中，直至需要时使用。仅解冻计划实验所需的适当数量的试剂管。每管SAM分析溶液包含足以使用384孔黑色微孔板进行五十（50）次SAM测量的试剂。将SAM分析溶液在37℃下解冻30分钟，并在室温下保存，直至使用。任何未使用的试剂可在4°C的冰箱中密闭存放一周。SAM检测试剂盒

试剂在-20°C下储存时将保持其活性至少2个月。