QA-Bio是一家致力于提供糖基化研究工具的公司，所提供的糖基化研究产品涵盖糖苷内/外切酶，去糖基化没，唾液酸产品，多糖产品纯化试剂盒，多糖标记试剂盒等，同时提供多糖分析服务。

qa-bio E-RPNG01说明书

产品编号：E-RPNG01

内切糖苷酶

- 内切糖苷酶切割来自糖蛋白的完整聚糖 - 
清洁制剂中的高度稳定的酶 - 不含甘油，NaCl或其他添加剂，如EDTA。
- 测试所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

内切糖苷酶是用于分析糖蛋白的广泛使用的酶。这些酶从糖蛋白释放完整的聚糖，而外切糖苷酶释放单个单糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶组中，因为其切割完整的N-连接聚糖具有相似的活性，尽管它实际上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-连接聚糖的壳二糖核心的个β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之间切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之间切割N-连接的聚糖，留下带电荷的残基，其有助于增加去糖基化蛋白质的溶解度，降低蛋白质聚集体沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-连接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定类型的N-连接聚糖。

酶的这种分类还包括O-糖苷酶，其从丝氨酸或苏氨酸氨基酸中除去核心1O-连接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。通常，O-连接的聚糖含有在分支和线性连接中与半乳糖连接的另外的单糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶来除去额外的糖。

重组PNGase F.

来自Elizabethkingia miricola的重组PNGase F.

产品编号 - 酶
E-RPNG01的量 - 60μLs

E -RPNG01-20 - 20μls¹

E -RPNG01-200 - 200μls²¹ 
  包括缓冲液，变性剂和Triton- 
  X²仅含酶

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

从含有Elizabethkingia miricola基因的克隆的大肠杆菌菌株中分离重组PNGase F. 来自天然酶（E-PNG01）的重组酶的活性或比活性没有可检测到的差异。

PNGase F从糖蛋白切割天冬酰胺连接的（N-连接的）寡糖。PNGase F将天冬酰胺脱氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性使裂解率提高到100倍。大多数天然蛋白质仍然可以*N-去糖基化，但必须增加孵育时间。PNGase F将在孵育条件下保持活性至少72小时。PNGase F不会去除植物糖蛋白上常见的含有α-（1,3） - 连接的核心岩藻糖的寡糖; 为此目的，使用肽N-糖苷酶A.

PNGase F源自Elizabethkingia miricola的大肠杆菌重组PNGase F基因

EC 3.5.1.52

内容
的重组PNG酶F（0.3 U）在20mM的Tris-HCl，pH 7.5中60微升等分试样
包括用20μL和60μL包尺寸
5倍PNG酶?F反应缓冲液7.5 PNG酶的F - 250 mM磷酸钠，pH 7.5中
PNG酶?F变性溶液 - 2％SDS，
1Mβ- 巯基乙醇PNGase F Triton X-100-15％溶液

比活度 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道尔顿

PNGase F 6-10的pH范围，适合7.5

PNGase F建议用法
1.在Eppendorf管中加入高达200μg的糖蛋白。用去离子水调节至35μl终体积。
2.加入10μl5xPNGase F反应缓冲液7.5和2.5μlPNGaseF变性溶液。在100?C加热5分钟。
很酷。加入2.5μlPNGaseF Triton X-100并混合。
4.向反应中加入2.0μlPNGaseF. 在37?C孵育3小时。

特异性 PNGase F从糖蛋白切割天冬酰胺连接的（N-连接的）寡糖。PNGase F将天冬酰胺脱氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性使裂解率提高到100倍。大多数天然蛋白质仍然可以*N-去糖基化，但必须增加孵育时间。PNGase F将在孵育条件下保持活性至少72小时。PNGase F不会去除植物糖蛋白上常见的含有α-（1,3） - 连接的核心岩藻糖的寡糖; 为此目的，使用肽N-糖苷酶A.

比活度定义为在37℃，pH7.5下，在1分钟内催化从1微摩尔RNase B释放N-连接寡糖所需的酶量。通过SDS-PAGE监测切割（切割的RNase B迁移更快）。

储存酶储存在4?C。

PNGase F参考文献
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- Elder，JH和S. Alexander。endo-bN-Acetylglucosaminidase F：来自Flavobacterium meningosepticum的内切糖苷酶，可裂解高甘露糖和复合糖蛋白。 Proc Natl Acad Sci USA 79： 4540-4544（1982）

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