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中級(jí)會(huì)員 | 第22年

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電泳槽常見問(wèn)題及解決辦法

時(shí)間:2017/4/18閱讀:2357
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電泳槽時(shí)凝膠時(shí)間不對(duì),那么通常膠在60min,1H內(nèi)凝,如果凝的太慢,可能是TEMEN,APS劑量不夠或者失效。APS應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用,TEMED不穩(wěn)定,容易被氧化成黃色。如果凝的太快,可能是APS和TEMED用量過(guò)多,此時(shí)膠太硬易裂,電泳時(shí)易燒膠。

紋理和托尾現(xiàn):由于樣品溶解不佳引起的,克服的方法可以在加樣前離心,增加一些增溶輔助試劑如尿素。

蛋白帶過(guò)寬,與鄰近泳道的蛋白帶相連時(shí)由于加樣量太多,可以減少上樣量。

電泳時(shí)間比正常要長(zhǎng)??赡苡捎谀z緩沖系統(tǒng)和電極緩沖系統(tǒng)的PH選擇錯(cuò)誤,即緩沖系統(tǒng)的PH和被分離物質(zhì)的等電點(diǎn)差別太小,或緩沖系統(tǒng)的離子強(qiáng)度太高。

指示劑成微笑符號(hào)(指示劑前沿呈現(xiàn)向上的曲線形),說(shuō)明凝膠的不均勻冷卻,中間部分冷卻不好,導(dǎo)致分子有不同的遷移率所致。

指示劑成哭臉?lè)?hào)(指示劑前沿呈現(xiàn)向下的曲線形),由于電泳槽的裝置不合適,尤其是凝膠和玻璃板組成的“三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不*。

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