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公司動態(tài)

“恒遠公司”ELISA操作流程

閱讀:999          發(fā)布時間:2013-4-8

 ELISA操作流程:

1. 根據需要,將若干孔德條帶放置在支架上;

 

2. 將標本、陰性質控、陽性質控以及標準品作 1200 稀釋將5μl樣品加稀 釋液稀釋到 1ml,混勻

 

3. 100μl 已稀釋的血清樣品、標準品和陰性質控、陽性質控加入相應得孔板 質控和標準品至少需做兩孔A1 孔不加液體作為空白底色;

 

4. 37溫箱中放置 30 分鐘;

 

5. 到時間后將孔被液體甩去,并用 1X 洗滌液反復清洗 4 次,zui后用蒸餾水洗 一次;

 

6. 在每孔內加 100μl 酶結合物需按比例稀釋,除 A1 孔外,輕微混勻;

 

7. 37溫箱中放置 30 分鐘;

 

8. 甩去孔內酶結合物,用 1X 洗滌液反復清洗 4 次,zui后用蒸餾水洗一次;包括 A1 孔也加,輕微

 

9. 在每孔內加 100μlTMB(使用前混合A液和B液混勻;

 

10. 37放置 15 分鐘; ,輕微混勻;

 

11. 每孔加 50μl 1N 硫酸終止液包括 A1

 

12. 15 分鐘內,用酶標儀在 450nm 處讀取吸光度值(OD ) (將酶標儀 A1 孔設定為空白孔

 

二、 ELISA試劑盒結果換算

 以標準樣品的 OD 值為軸,標準樣品的數(shù)值為 X 軸,在方格紙或計算機上作 出標準曲線,然后根據標本的 OD 值讀數(shù)在標準曲線上讀出相應的 IgG 抗體 濃度。

 

三、 ELISA試劑盒果判定

 陰性:抗體濃度≤20u/ml 為正常 陽性:抗體濃度>20u/ml 為陽性

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