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公司動(dòng)態(tài)

“恒遠(yuǎn)公司”ELISA操作流程

閱讀:1002          發(fā)布時(shí)間:2013-4-8

 ELISA操作流程:

1. 根據(jù)需要,將若干孔德條帶放置在支架上;

 

2. 將標(biāo)本、陰性質(zhì)控、陽(yáng)性質(zhì)控以及標(biāo)準(zhǔn)品作 1200 稀釋將5μl樣品加稀 釋液稀釋到 1ml,混勻;

 

3. 100μl 已稀釋的血清樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和陰性質(zhì)控、陽(yáng)性質(zhì)控加入相應(yīng)得孔板 內(nèi)質(zhì)控和標(biāo)準(zhǔn)品至少需做兩孔A1 孔不加液體作為空白底色;

 

4. 37溫箱中放置 30 分鐘;

 

5. 到時(shí)間后將孔被液體甩去,并用 1X 洗滌液反復(fù)清洗 4 次,zui后用蒸餾水洗 一次;

 

6. 在每孔內(nèi)加 100μl 酶結(jié)合物需按比例稀釋?zhuān)?/span> A1 孔外,輕微混勻;

 

7. 37溫箱中放置 30 分鐘;

 

8. 甩去孔內(nèi)酶結(jié)合物,用 1X 洗滌液反復(fù)清洗 4 次,zui后用蒸餾水洗一次;包括 A1 孔也加,輕微

 

9. 在每孔內(nèi)加 100μlTMB(使用前混合A液和B液混勻;

 

10. 37放置 15 分鐘; ,輕微混勻;

 

11. 每孔加 50μl 1N 硫酸終止液包括 A1

 

12. 15 分鐘內(nèi),用酶標(biāo)儀在 450nm 處讀取吸光度值(OD ) (將酶標(biāo)儀 A1 孔設(shè)定為空白孔。

 

二、 ELISA試劑盒結(jié)果換算

 以標(biāo)準(zhǔn)樣品的 OD 值為軸,標(biāo)準(zhǔn)樣品的數(shù)值為 X 軸,在方格紙或計(jì)算機(jī)上作 出標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后根據(jù)標(biāo)本的 OD 值讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出相應(yīng)的 IgG 抗體 濃度。

 

三、 ELISA試劑盒結(jié)果判定

 陰性:抗體濃度≤20u/ml 為正常 陽(yáng)性:抗體濃度>20u/ml 為陽(yáng)性

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