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小鼠胰島素試劑盒操作原理

閱讀:1434          發(fā)布時間:2012-12-3

小鼠胰島素試劑盒實驗規(guī)則:
       1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M行確定。但有專業(yè)人員進行矯正。
        2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
        3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
        4、實驗時,要使底物避光保存。
        5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。
        6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
        7、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
        8、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
        9、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發(fā)。
        10、洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
        11、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
        12、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
        13、檢測前,要打開酶標儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
        14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
        15、待檢樣品要澄清,否則會影響結(jié)果。
        16、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
        17、應(yīng)盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數(shù)據(jù)的準確性。
        18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
小鼠胰島素(INS)Elisa試劑盒操作步驟
1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μ;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。
10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
 

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