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人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒

閱讀:848          發(fā)布時間:2014-10-30
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人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 IL-18BP 單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 IL-18BP與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人IL-18BP,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,zui后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,IL-18BP濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IL-18BP濃度。

試劑盒組成2-8℃保存)

酶標(biāo)板(Coated Wells)

96孔

酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate)

12ml

10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer)

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer)

50ml

標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):4ng/瓶

2瓶

底物工作液(TMB Solution)

12ml

*抗體工作液(Biotinylated Antibody)

12ml

終止液(Stop Solution)

12ml

人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.          收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復(fù)凍融。血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清至少作15稀釋(取50ul,加標(biāo)本稀釋液200ul,稀釋5倍)。

2.          標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成4000pg/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,每管加入標(biāo)本稀釋液300ul。在*管中加入4000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。

3.          10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

4.         洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒檢測程序

1.          加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。

2.          洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。

4.          洗板:同前。

5.          每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。

6.          洗板:同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。

8.          每孔加入100ul終止液混勻。

9.          30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1.          所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

2.          以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)IL-18BP含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。

人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒性能

             1.   靈敏度:zui小的IL-18BP 檢測濃度小于15pg/ml。

2.        特異性:可同時檢測重組或天然的人IL-18BP。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3.        重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.2%。

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