FoxO1,小鼠叉头框蛋白01酶联免疫试剂盒原理

l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠叉头框蛋白01（FoxO1）的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

l 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠叉头框蛋白01（FoxO1）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠叉头框蛋白01（FoxO1）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

FoxO1,小鼠叉头框蛋白01酶联免疫试剂盒原理性能

1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。处

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

用于检测未知抗体的间接法：

用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。

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加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）

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于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml， 　　37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。

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加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

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终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

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结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

组成

48孔配置 96孔配置 保存

说明书 1份 1份

封板膜 2片(48) 2片(96)

密封袋 1个 1个

酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

标准品：13.5U/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶标试剂 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

样品稀释液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 30ml×1瓶 2-8℃保存

样品收集、处理

1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。