Protamine,人鱼精蛋白酶联免疫试剂盒多少钱

l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人鱼精蛋白（Protamine）的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

l 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人鱼精蛋白（Protamine）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人鱼精蛋白（Protamine）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

Protamine,人鱼精蛋白酶联免疫试剂盒多少钱【试剂盒中内容】(96T)

材料 数量

标准品 96T(2vial)

预包被抗体的96孔板 96T（8×12）

生物素标记人ANG抗体 96T (1:100)

ABC（亲和素-过氧化物酶复合物） 96T (1:100)

样品稀释液 96T×2

抗体稀释液 96T×1

ABC稀释液 96T×1

TMB显色液A 96T×1

TMB显色液B 96T×1

TMB终止液 96T×1

ELISA洗涤液 96T×1(1:25)

【需要而未提供的试剂和器材】

1． 37℃恒温箱。

2． 标准规格酶标仪。

3． 自动洗板机。

4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

5． 蒸馏水，容量瓶等

6． 干净的试管和Eppendof管。

【注意事项】

1. 从-20℃取出的试剂盒，在4℃解冻guoye。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。

2. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

3. 配制各种试剂时，切记混匀！

4. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

5. 建议所有标准品、样本都做双份检测。

6. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！

7. 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

【洗板方法】

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

【样品的准备和保存】

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃guoye，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

【样品稀释的一般原则】

用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*检测范围。样品的稀释应有详细记录。

【试剂的准备和保存】

A. 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，*溶解后做倍比稀释。

8稀释后的标准品在2小时内使用。

B．生物素标记抗体工作液：在使用前2小时内准备。

1.  根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。

2．按10ul生物素标记抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。

1．根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。

2．按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

D. TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。

【操作程序】

1． 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。

3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。

4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。

5． 将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。

7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。

9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应zui长不要超过30分钟）。

10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。

11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。