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恒远文献：雌、雄性大鼠局灶性脑缺血再灌注早期脑损伤的研究
阅读：491 发布时间：2020-1-17雌、雄性大鼠局灶性脑缺血 － 再灌注早期脑损伤的研究* ＊
郭淑娟1，王琮民2＊＊
(1． 邯郸市中心医院 老年病科，河北 邯郸 056001; 2． 河北工程大学附属医院 神经内科，河北 邯郸 056000)
［摘 要］目的: 研究性别对局灶性脑缺血 － 再灌注大鼠早期脑损伤的影响。方法: 随机取雌、雄健康 SD 大鼠各 12 只，分别记为 F 组和 M 组，采用栓线法制作大鼠中动脉栓塞模型，于缺血 2 h 再灌注 24 h 后断头取脑，采用 TTC 染色并测量各组大鼠脑梗死体积，采用新型荧光探针 H2DCF-DA 监测大鼠脑内活性氧自由基(ROS)阳性细胞数目并检测平均荧光强度。结果: 缺血 2 h 再灌注 24 h 内，F 组和 M 组大鼠的死亡率分别为 8. 33 % 和16. 77 % ，差异无统计学意义(P ＞ 0. 05);TTC 染色显示，F 组脑梗死体积为(21. 42 ± 3. 54)% ，M 组为(40. 01 ±4. 92)% ，F 组小于 M 组 (P ＜ 0. 05);H2DCF-DA 染色显示，F 组和 M 组的脑缺血半暗带区 ROS 阳性细胞数目分别为 8. 56 ± 1. 89 和 19. 04 ± 1. 37，F 组少于 M 组(P ＜ 0. 05)，平均荧光强度分别为 20. 58 ± 0. 89 和 39. 25 ± 1. 41，F 组少于 M 组(P ＜ 0. 05)。结论: 雌鼠缺血 － 再灌注损伤在短期内较轻，其机制可能与雌性大鼠脑组织抑制氧
自由基能力较强有关。［关键词］性别因素; 脑缺血; 脑梗死; 体积; 氧自由基缺血性脑卒中一般是指由于脑动脉粥样硬化引起血管腔狭窄或*闭塞，导致局部脑血流中断，脑细胞缺血缺氧软化坏死的疾病。缺血性脑卒中的危害性大，*低，严重影响患者的生活质量［1］。有报道指出，绝经前女性的脑卒中发病率低于同龄男性，而且对缺血损伤的耐受性高，但绝经后女性的脑卒中发生率显著增加，提示雌激素水平变化与缺血性脑病的发生发展可能有一定关系［2］。有研究发现雌激素可促进卒中后的脑神经再生，有利于神经功能恢复［3］。以往多采用去卵巢或绝经的雌性大鼠观察雌激素对缺血性脑卒中的影响［4 － 6］，但对同等损伤程度、正常生理激素水平及性别因素是否会对缺血性脑卒中产生影响，特别是缺血 － 再灌注短期内的影响鲜有报道，本实验探讨正常生理激素水平下性别对局灶性脑缺血 －再灌注大鼠早期脑损伤的影响。
1 材料与方法
1. 1 试验设备及试剂呼吸机(CWE 公司，美国)、DGD-300S 双极电凝 (Sigma 公司，美国)、反馈式温度调节仪(CZ 公司，美国)、透射电镜(Olympus 公司，日本)、BH-2手术显微镜 ( Olympus 公司，日本)、高速离心机(Beckman 公 司，美 国); TTC ( 上 海 恒 远 公 司)、H2DCFA-DA 试剂盒(CWE 公司，美国)，水合氯醛(10% )、磷酸二氢钠等。
1. 2 试验动物及模型制作成年 SD 雌、雄大鼠各 12 只，分别记为 F 组和M 组，体质量 250 ～ 300 g，许可证号 SYXK( 冀)2014 － 0038，采用标准配方饲料分笼饲养，室温 22～ 25 ℃，术前禁食，自由进水。大鼠用 10% 水合氯醛腹腔注射麻醉(3. 5 μL /g)，取颈部正中切口，上切至颈与下颌反折处，下切至胸骨角，剪开阔筋膜，找左侧颈总动脉(CCA) 分叉、分离左侧颈外动脉(ECA) 和颈内动脉( ICA)，结扎 ECA 远心端，离断，CCA 和 ICA 用动脉夹夹闭，在 ECA 上剪“V”型口并将备好的栓线沿剪口插入，轻轻结扎，然后松ICA 动脉夹，栓线调整角度顺势插入 ICA，遇阻力停止，深度约为 18 mm。将栓线与左侧 CCA 结扎固定，移去 CCA 动 脉 夹，脑缺血模型制备成功。2 h后，将栓线从颅内轻轻拔出，从球端退至 ECA止，剪掉多余的线并缝合皮肤，再灌注开始，记录再灌注时间至 24 h 时止［7］。
1. 3 测定脑梗死体积再灌注 24 h 时，大鼠腹腔注射过量 10% 水合氯醛麻醉，迅速断头，取完整全脑， － 24 ℃ 冷冻30 min，从额极至枕极沿冠状位切 2 mm 厚度切片6 片，除第 5 片用于 H2DCF-DA 染色计数 ROS 细胞外，其余 5 片均浸泡于 2% TTC 染色液中，37 ℃温箱中孵育 20 min，每隔 5 min 翻动正反面，拍照，Imageplus5. 0 计算脑梗死体积。脑梗死体积百分比 = (A － B) /A × 100% ，A 为健侧大脑半球体积= (A1 + A2 + …A6 )·h，B 为梗死侧非梗死区大脑半球体积 = (B1 + B2 + …B6 )·h，A1 为第 1 片切片健侧脑组织面积，B1 代表第 1 片梗死侧非梗死区脑组织面积，h 表示切片厚度［8］。
1. 4 测定活性氧自由基(ROS)阳性细胞数目每个大鼠均取第 5 片脑切片用 H2DCF-DA 染色，按说明书操作，每张切片同等放大倍数拍照，借用 NIS Element 软件，确定脑组织内的 ROS 阳性细胞数和其分布密度。
1. 5 统计学方法用 SPSS 20. 0 软件进行数据分析，两组死亡率比较用 Fisher 精确概率法，计量资料用均数 ± 标准差( x ± s )表示，组间比较用单因素方差分析法，P＜ 0. 05 为差异有统计学意义。
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