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恒远文献：红花黄色素注射液对高原地区颅脑损伤大鼠血浆
阅读：393 发布时间：2019-12-27红花黄色素注射液对高原地区颅脑损伤大鼠血浆
CGＲP 含量及神经功能评分的影响
汪 涛，马进海，张广华
( 青海大学附属医院，青海 西宁 810001)
摘要 目的: 探讨红花黄色素注射液治疗高原地区颅脑损伤大鼠的效果及对血浆降钙素基因相关肽( CGＲP)及神经功能的影响。方法: 选取 120 只 SPF 级成年雄性 Wistar 大鼠随机分为假手术组、模型组及红花注射液低、中、高剂量组，每组各 24 只，所有大鼠均于高原地区( 4 300 米海拔) 饲养 30 d，除假手术组外各组大鼠建立颅脑损伤模型，假手术组和模型组分别腹腔注射等体积生理盐水，红花黄色素注射液低、中、高剂量组分别腹腔注射红花黄色素注射液 15、30、60 mg /kg，连续给药 14 d 后检测相关指标。结果: 模型组在干预第 3、7、14 天血浆 CGＲP、SOD显著低于假手术组( P ＜ 0. 05) ，红花黄色素注射液各剂量组血浆 CGＲP、SOD 在干预第 3、7、14 天显著高于模型组
( P ＜ 0. 05) ; 模型组在干预第 3、7、14 天血浆 NSE、mNSS 评分、神经细胞凋亡率及脑组织 5-HT 含量显著高于假手术组( P ＜ 0. 05) ，红花黄色素注射液各剂量组血浆 NSE、mNSS 评分、神经细胞凋亡率及脑组织 5-HT 含量在干预第 3、7、14 天显著低于模型组( P ＜ 0. 05) 。其作用呈量效关系。结论: 红花黄色素注射液对高原地区颅脑损伤大鼠具有显著的疗效，能显著增加血浆中 CGＲP 含量，改善大鼠神经功能。
关键词 红花注射液; 高原地区; 颅脑损伤; 降钙素基因相关肽; 神经功能
创伤性颅脑损伤为神经外科常见疾病，是儿和青年致死、致残的重要原因，随着现代经济快速发
展和人口流动增加，国内各种交通事故、意外伤害等导致颅脑损伤比例逐年提升，严重的影响患者的生活质量。青海地处西部，在高原环境下颅脑损伤已成为研究的热点〔1〕。中医学认为颅脑损伤为瘀血内停，阻闭清窍所致，损伤发生后脉络破损，血离静脉，离经之血化为瘀血，阻滞脑络，导致患者脑失清灵，元神困扰，终引发了颅脑损伤的各种病理改变〔2〕。本研究观察了红花黄色素注射液对高原地区颅脑损伤模型大鼠血浆降钙素基因相关肽以及神经功能的影响，现将结果报道如下。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级雄性 Wistar 大鼠 120 只，体质量 180 ～ 220 g，购自上海交通大学实验动物研究中心，实验动物生产许可证号: SCXK( 沪) 2015-01-004，所有大鼠均于高原地区( 4 300 米海拔) 饲养 30d。
1. 2 药 物 与 试 剂 红花黄色素注射 液，批 号:20140418，浙江永宁药业股份有限公司生产; 白细胞
介素 6 及神经元特异性烯醇化酶酶联免疫吸附试剂盒为武汉伊莱瑞特生物科技有限公司; 超氧化物歧化酶和丙二醛测定试剂盒，南京建成生物工程研究所; TUNEL 试剂，上海芯超生物科技有限公司; 内
皮素、降钙素相关基因肽检测试剂，上海恒远生物科技有限公司。
1. 3 主要仪器 5810Ｒ 高速冷冻离心机，德国 Eppendorf 公司; MULTISKAN FC 酶标仪器，赛默飞世
尔上海有限公司; CX41 显微镜，日本奥林巴斯; FS /FAS5030 石蜡切片机器，德国 LETIZ 公司。
2 方法
2. 1 动物造模、分组及给药 大鼠禁食 8 h，禁水 2h 后采取腹腔麻醉，在大鼠矢状线切开透皮 2. 0 cm，暴露出前囟、冠状缝合两侧的顶骨，在大鼠右侧前囟后 4 mm 中线旁开 2 mm 行直径 5 mm 骨窗，保证硬膜的完整，使用 20 g 砝码从 50 cm 高处垂直落下撞击大鼠致伤形成颅脑损伤模型，以测定内皮素含量和大鼠降钙素基因相关肽含量显著升高表示模型建立成功。成模动物分为模型组及红花黄色素注射液低( 15 mg /kg) 、中( 30 mg /kg) 、高( 60 mg /kg) 剂量组，另设假手术组，假手术组只进行开颅不进行撞伤。假手术组和模型组分别腹腔注射相应体积生理盐水，红花黄色素注射液各组分别给予红花黄色素注射液腹腔注射，连续治疗 14 d。
2. 2 指标检测
2. 2. 1 血浆降钙素基因相关肽( CGＲP) 、神经元特异化烯醇化酶( NSE) 、超氧化物歧化酶( SOD) 检测:于各组大鼠干预后第 3、7、14 天将大鼠采取 10% 水合氯醛( 3 mL /kg) 腹腔注射麻醉，腹主动脉取血并加入肝素抗凝，分离血浆检测 CGＲP、NSE、SOD 水平，均采用酶联免疫吸附法测定。
2. 2. 2 TUNEL 染色观察各组大鼠神经细胞凋亡率: 断头取脑放置在冰盘剥离损部位大脑皮质，生理
盐水进行冲洗放入试管置冰箱备用，常规制片及染色后在 200 倍显微镜下，每张切片随机选取 5 个视
野观察凋亡小体的数量，并计算凋亡率。凋亡率 = 凋亡小体视野内神经细胞总数量 × 100%
2. 2. 3 脑组织中 5 羟色胺( 5-HT) 含量检测: 采用反相高效液相色谱法以二羟苄胺作为标记物，每 10
mg 脑组织加入 50 mL 裂解液，加入内标后在冰浴内进行超声破碎，匀浆，4 ℃，15 000 r/min 离 心 30min，取上清液，再离心 30 min，转速温度相同，使用0. 22 μm 滤膜在抽滤器进行过滤，取出滤过液体 20μL，测定脑组织中的单胺类神经递质含量。
2. 2. 4 大鼠神经功能评分: 采用通用的改良大鼠神经功能缺损评分法( mNSS) 在干预后第 3、7、
14 天，该评分系统主要包含大鼠的感觉、运动、反射、平衡四个方面，总分 0 ～ 18 分，13 ～ 18 分为重度损伤; 7 ～ 12 分为中度损伤; 1 ～ 6 分为轻度损伤; 正常为 0 分。
2. 3 统计学处理 采用 SAS 10. 0 统计软件进行统计分析，计量资料采用 x珋± s 进行描述，采用方差分析进行统计，组间两两比较采用 LSD-t 检验; 以 P ＜0. 05 为差异有统计学意义。
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