ASFV检测非洲猪瘟抗体检测试纸
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ASFV检测非洲猪瘟抗体检测试纸
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(6)加入1/10体积3mol/l NaAc (pH5.2),再加入两倍体积的无水乙醇沉淀核酸,-20°C放置1h或过夜。4°C、12000g离心20min。
(7)沉淀分别用70%乙醇和无水乙醇洗涤一次,4°C、12000g离心10min,弃液体,室温放置晾干除去残余液体。
(8)用适量TE溶解沉淀,获得噬菌体基因组DNA样品。
三、CTAB抽提法去除基因组DNA中的多糖
(1)在600μl样品中加入100μl 5mol/l NaCl,充分混匀,再加入80μl 10% CTAB/0.7mol/l NaCl液,混匀溶解,65°C温育10min。
(2)加等体积*,振荡混匀,12000g离心5min,收集上层水相。
(3)加入等体积的酚-*-异戊醇(25:24:1),振荡混匀,12000g离心5min,收集上层水相。
(4)加入终浓度0.3mol/l NaAc和2倍体积的无水乙醇沉淀核酸,-20°C放置1h或过夜。
(5)4°C 12000g离心10min。
(6)沉淀分别用70%乙醇和无水乙醇洗涤一次,4°C、12000g离心10min,弃液体,室温放置晾干除去残余液体
(7)用适量TE溶解沉淀,分装后于-20°C保存备用。
四、部分试剂配制
1、SM液:NaCl 5.8g,MgSO4?7H2O 2g,1M Tris?CL(pH7.5)50ml,2%明胶 5ml,加ddH2O 至1000ml。121°C高压灭菌20min。
2、RNase A 10mg/ml,TE配制,沸水浴15min,分装后贮存于-20°C。
3、DNase I 10mg/ml,TE配制,分装后贮存于-20°C。
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