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實(shí)驗(yàn)事培育細(xì)胞無菌操作

2012-2-1 閱讀(1519)

培育細(xì)胞無菌操作

1. 無菌操作辦公地區(qū)范圍應(yīng)維持保潔及寬闊,*東西,例如玻璃管架、吸管、汲取器或吸管盒等可以短時(shí)間之內(nèi)安放,其他實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 ethanol 揩拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌地區(qū)范圍,勿在邊緣的非無菌地區(qū)范圍培養(yǎng)箱KLYQ操作。

2. 實(shí)驗(yàn)施行前,無菌室及無菌操作臺(tái)(laminar flow) 以紫外燈映射30-60 分鐘滅菌,以70 ethanol 揩拭無菌操作臺(tái)面,并開啟無菌操作颶風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,才著手實(shí)驗(yàn)操作。每每操作只處置一株細(xì)胞株,且縱然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)相同亦不共享營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),以防止差錯(cuò)淆惑或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完結(jié)后,將實(shí)驗(yàn)東西帶出辦公臺(tái),以70 ethanol 揩拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后,運(yùn)用霉菌培養(yǎng)箱二氧化碳培養(yǎng)箱再施行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

3. 謹(jǐn)慎取用無菌的實(shí)驗(yàn)東西,防止導(dǎo)致污染。勿碰觸吸管尖頭部或器皿瓶口,亦不要在敞開的器皿正上方操作實(shí)驗(yàn)。器皿敞開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾側(cè)約45° 角取用,盡力勿將瓶蓋蓋口朝上安放桌面兒。

4. 辦公擔(dān)任職務(wù)的人應(yīng)注意自身的安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套兒后才施行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來自人的總稱或是病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)尤其謹(jǐn)慎操作,并挑選合適等級(jí)的無菌操作臺(tái)(至少Class II)。操作過程中,應(yīng)防止引動(dòng)aerosol 的萌生,謹(jǐn)慎毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并防止尖銳針頭的損害等。

 

5. 定期檢驗(yàn)測(cè)定下面所開列項(xiàng)目:

 

  1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力

 

  1.  二氧化碳培養(yǎng)箱的CO2 液體濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周改易)。

 

  1. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow 壓力,定期改易太陽燈管及HEPA 過淋膜,預(yù)濾網(wǎng)(300鐘頭/預(yù)濾網(wǎng),3000 鐘頭/HEPA)。


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