WB實驗注意細(xì)節(jié)

1. 細(xì)胞樣本，收細(xì)胞時， PBS預(yù)冷。

2. 組織樣本在取材時離體組織應(yīng)盡快凍存，可以置于液氮中迅速冷凍，使用組織勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿時， 一次研磨時間不宜過長， 40s左右即可，如研磨不充分，可再次研磨。

3. PMSF應(yīng)注意搖勻至無結(jié)晶時方可使用。

4. 冰上裂解時，可以晃動以使裂解充分。

5. 裂解后的樣本盡量分裝保存，避免反復(fù)凍融，盡快變性使用。

6. BCA定量時盡量不使用96孔板最邊緣一圈（由于有些儀器邊緣效應(yīng)）。

7. 樣本可以根據(jù)具體情況稀釋合適的倍數(shù)再進(jìn)行定量，以免超出標(biāo)曲范圍。

8. BCA定量時，可以使用儀器中速輕微震蕩3-10秒，混勻96孔板內(nèi)液體，再進(jìn)行測量。

9. 變性時，注意加熱后小心管蓋爆開。

10. 配膠時，板子一定徹底清洗干凈。

11. 配膠的各組分注意充分混勻。

12. 點樣時，多余的孔可以用loading buffer補齊。

13. 轉(zhuǎn)膜時， 一定帶手套才可以觸碰濾紙和膜，以防污染。

14. 轉(zhuǎn)膜不可放反，牢記黑膠白膜，注意電極正負(fù)極。

15. 封閉時， BSA或牛奶一定充分溶解。

16. 抗體種屬要注意區(qū)分。

17. 洗膜要充分。

18. 顯影液應(yīng)滴加均勻。

從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年，是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。

實驗技術(shù)服務(wù)：