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液相色譜儀的操作小要求
閱讀：546 發(fā)布時間：2020-11-16
操作液相色譜儀的要求
1.流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm或更細的膜過濾)。
2.流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。
3.不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。
4.使用緩沖溶液時，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
5.長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相(如，甲醇等)，因為，純水易長霉。
6.每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。
7.C18柱不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。
8.堵塞導致壓力太大，按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗，清洗方法：
①以異丙醇作溶劑沖洗；
②放在異丙醇中間用超聲波清洗；
?、塾?0%稀硝酸清洗；
9.氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
10.如果進液管內(nèi)不進液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。
12.更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。
舉個例子：
1.泵
泵是液相色譜儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵，基線平穩(wěn)，保留時間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時壓力變化緩慢而且平穩(wěn)：
1)選擇優(yōu)質(zhì)的溶劑和試劑，在進入儀器前用 0.45μm 膜過濾，并進行脫氣處理;
2)泵開始使用時，一定要用合適的流動相*清洗干凈;
3)定期檢查并更換在線過濾片及有關(guān)的墊圈，經(jīng)常清洗進液處的微孔濾頭;
4)改變流動相時，應注意沉淀的產(chǎn)生，以防止泵堵塞;
2.色譜柱
色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù)，基線平穩(wěn):
1)色譜柱比較嬌氣不能夠碰撞、彎曲或強烈震蕩;安裝時要保證閥件或管路的清潔;
2)流動相在使用前必須進行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動相;
3)在滿足靈敏度的前提下，盡可能的使用小進樣量。如果樣品比較臟，要進行凈化或提純處理;
4)分析結(jié)束后要清洗掉進樣閥中殘留的樣品，并用流動相或適當?shù)娜軇┣逑瓷V柱;
5)如，長期不用，用適當?shù)挠袡C溶劑保存并封閉或定期補充合適的流動相。
3.檢測器
分析完成后，馬上關(guān)閉檢測器。
4.進樣器
分析結(jié)束后反復沖洗進樣口，防止樣品的交叉污染或堵塞。