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四環(huán)凍干機(jī)—生物制品和生物組織凍干技術(shù)(二)

閱讀:745      發(fā)布時(shí)間:2023-3-24
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5.2

菌種和疫苗的凍干

在眾多的菌種保藏方法中,冷凍真空干燥法所提供的低溫、真空條件,可使所保藏的菌種保藏更長(zhǎng)的時(shí)間。例如,王永成等人對(duì)布氏菌株的凍干進(jìn)行了研究,將凍干保存了14~19年的11株布氏菌株接種、培養(yǎng)后,對(duì)其進(jìn)行觀察,全部存活。另有報(bào)道稱凍干保存鼠疫菌25年。

而且在凍干菌株被使用時(shí),只需提供水分使之復(fù)水即可再生,方便實(shí)際應(yīng)用。凍干菌株保藏效果也較其他方法*。

5.2.1醋酸菌菌種凍干

邵偉等人研究了醋酸菌菌種的凍干。將30℃培養(yǎng)2~3天的醋酸菌斜面,分別用3mL的5%、10%和20%的無(wú)菌脫脂牛奶洗下,制成菌懸液,充分混勻,用無(wú)菌吸管加入無(wú)菌安瓿管中。并將它們分2組分別置于-30℃或-60℃預(yù)凍2h,然后取出進(jìn)行冷凍干燥。

冷凍干燥機(jī)接通電源后,在溫度降至-40℃時(shí),放入裝有菌體的安瓿管,開啟真空泵,凍干機(jī)經(jīng)過3~5min溫度降至-55℃,待真空表讀數(shù)穩(wěn)定不變后,保持4~8h,然后,將安瓿管封口保存。將經(jīng)不同方式處理的醋酸菌保藏種置于4~10℃保藏一年后取出,用無(wú)菌生理鹽水溶解制成菌懸液,稀釋成不同濃度,再分別涂布于3個(gè)培養(yǎng)皿,培養(yǎng)72h觀察計(jì)數(shù),取其平均值。預(yù)凍溫度對(duì)凍干菌的影響見圖5-1。

圖片

圖5-1表明,從細(xì)胞存活數(shù)的計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)來(lái)看,-60℃預(yù)凍的效果相對(duì)要好。這是因?yàn)榫?/span>懸液在-30℃預(yù)凍時(shí),其溫度已降到冰點(diǎn)以下,但結(jié)冰不夠堅(jiān)實(shí),真空干燥時(shí)易使菌懸液沸騰,菌體細(xì)胞受損失較多。而在-60℃預(yù)凍時(shí),結(jié)冰速率大且堅(jiān)實(shí),細(xì)胞損傷較少。

圖5-2是-60℃預(yù)凍并凍干的醋酸桿菌,經(jīng)不同保藏方式,在不同保藏時(shí)間后的活菌數(shù)比較。

圖片

圖5-2表明,醋酸菌在一年的保藏期內(nèi),凍干保藏的菌種其產(chǎn)酸能力下降較少,基本能保持穩(wěn)定,而斜面保藏和液體保藏的菌種其產(chǎn)酸能力下降梯度大??梢?,用冷凍干燥法保藏的醋酸菌在保持產(chǎn)酸能力方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。





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