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上海一基实业有限公司
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细胞培养的条件和要求技术人员做出了以下总结

时间:2011-6-29阅读:3240
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细胞培养的条件和要求主要有以下几个方面供客户参考,如需进一 步了解请与我们工作人员,谢谢

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1.所有与细胞接触的设备、器材和溶液等,都必须保持无菌,避免细胞外微生物的污染。


目前zui可靠和zui常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
如:玻璃制品、布类、金属制品:6.8kg20min。
橡胶制品:3.6~4.5kg10min。
培养用液,如Hanks液,水解乳蛋白:3.6~ 4.5kg10min。
实验中染菌物品和动物尸体等:6.8 kg20min。

试管、吸管等,则可采用干热灭菌;
一切不适于加热灭菌的液体,如人工合成培养液、小牛血清、胰蛋白酶等溶液,可采用过滤法除菌。

细胞培养中常用的消毒剂浓度及其使用场合

2.必须有足够的营养供应,而不可有有害的物质,包括极微量的有害离子的掺入,为此必须注意器材的清洗和配液用水的质量。 

细胞培养中对水的质量要求很高(见水处理)。 

3.保证有适量的氧气供应。 

细胞代谢需要有空气,否则细胞死亡。在用培养瓶进行静止培养,或用转瓶进行旋转培养时,只要培养的液体量不超过总容量的30%,通过与液面的空气交换,可以保证细胞有足够的氧气。当用罐子深层培养时,则必须通气,一般采用含5%CO2的空气,或根据需要将CO2、N2、O2和空气以不同比例混合,过量氧对细胞的生长也不利。 

4.需随时清除细胞代谢中产生的有害产物。 

细胞在代谢过程中会产生大量代谢废物,如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等,这些产物对细胞的生存有害,必须及时清除。在小量培养时,当培养基中酚红指示剂显示黄色,表示已有相当量乳酸产生,要及时更换新鲜的培养基。在大量培养时,则需随时测定葡萄糖和乳酸等含量,并调节灌流速度,使代谢产物保持在无害水平下。

5.有良好的适于其生存的外界环境,包括温度、pH、渗透压和离子浓度等。 

不同的细胞对pH的要求不同,一般来说适于细胞生长的pH在6.8~7.4,过高或过低均不利于细胞生长。如上所述,细胞在代谢过程中会产生大量乳酸,使培养的pH下降。为了保持培养液的pH,常在培养液内加入各种缓冲系统,如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3(CO2)、Tricineglycine,以及加缓冲剂Hepes液(常用浓度为10~50mol/L).

6.及时分种,保持合适的细胞密度

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