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测定意义:
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。
测定原理:
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,根据A530值可以计算样品中O2-含量。
自备实验用品及仪器:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、lv仿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体8mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体6mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:lv仿,自备。
超氧阴离子提取
1. 植物、动物组织:称取约0.1g样本,加入提取液1mL,充分研磨,12000rpm,4℃,离心20min,取20μL上清测定蛋白含量,其余上清作为待测样本。
2. 血清或培养液:直接测定。
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