测试盒名称：大  肠  菌  群  测  试  盒（单料型） 
   
   测试盒采用的测定方法： GB/T4789.3-2008大肠菌群MPN计数法 
   测试盒的结构特点：分前后两排透明方管，每个方管里面有一个特别设计的产气窗，前排三个方管，后排六个方管，均含单料LST培养基，大肠菌群发酵培养基产气，产气窗内产生气泡,；采用无菌包装，供用户一次性使用； 
   测试盒的特点：   
   （1） 对大肠菌群测定的方法是GB/T4789.3-2008中*法大肠菌群MPN计数法； 
   （2） 省去了繁杂的试剂配制、分装、消毒以及大量的收尾工作，及大地提高了实验室的工作效率，符合现代检验向快速、准确方向发展的要求； 
    （3） 试剂盒占用空间小，仅占原来一个样品的十分之一空间，减少玻璃器皿及培养箱的周转； 
   检测对象：食品、瓶装或桶装饮用（纯净）水 
   应用范围：疾病预防控制中心,食品生产厂家,技术*质检部门,商检局,海关。 
大肠菌群测试盒（单料型）使用说明 
（GB/T4789.3-2008*法大肠菌群MPN计数） 
准备测试盒 
●.排气泡：将测试盒前后分别以大约45度角倾斜，必要时可轻轻用力在桌面上敲击数下，以排除产气窗内气泡；并将样品编号填写在盒盖上； 
● 开口：将测试盒平放在桌面上，左手揭开活动盒盖，右手持经火焰消毒并冷却了的开口器, 在测试盒每管中间位置连续穿刺开口； 
样品的稀释 
    1.固体或半固体样品：称取25g样品，放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1 min～2min，或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2min，制成1：10的样品匀液。 
     2.液态样品：用无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 
     3. 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节。 
     4. 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头*不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1ml无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的稀释液。 
     5. 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制作10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1ml无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min. 
初发酵试验 
固体样品 
     1：10的匀液1mL三管、1：100的匀液1mL三管、1：1000的匀液1mL三管、采用单料型大肠菌群测试盒；；操作方法如下： 
前排三大管内接种1：10的样品匀液各1mL，后排共六管，其中三管接种1：100的样品匀液各1mL，另外三管接种1：1000的样品匀液各1mL，将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃培养箱内，培养48±2h后，产气窗内无气泡者，为大肠菌群阴性，如产气窗内有气泡者，则进行复发酵试验。 
据阳性管数查得大肠菌群zui可能数（MPN）检索表的实际数值报告结果 
液体样品（一般情况下有如下两种接种方式）： 
    A、原液1mL三管、1：10的样品匀液1mL三管、1：100的样品匀液1mL三管；操作方法如下： 
前排三大管内接种原液各1 mL，后排共六管，其中三管接种1：10样品匀液各1mL，另外三管接种1：100的样品匀液各1mL，将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃培养箱内，培养48±2h后，产气窗内无气泡者，为大肠菌群阴性，如产气窗内有气泡者，则进行复发酵试验。 
    据阳性管数查得大肠菌群zui可能数（MPN）检索表的实际数值除以10报告结果； 
     B、1：10的样品匀液1mL三管、1：100的样品匀液1mL三管、1：1000的样品匀液1mL三管；操作方法如下： 
前排三大管内接种1：10的样品匀液各1mL，后排共六管，其中三管接种1：100样品匀液各1mL，另外三管接种1：1000的样品匀液各1mL；将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃培养箱内，培养48±2h后，产气窗内无气泡者，为大肠菌群阴性，如产气窗内有气泡者，则进行复发酵试验。 
    据阳性管数查得大肠菌群zui可能数（MPN）检索表的实际数值报告结果. 
复发酵试验 
     用接种针从所有48±2h 内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物两针移种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，置36±1℃培养箱内，培养24±2h后，观察产气情况，产气者计为大肠菌群阳性管；没产气者，继续培养培养24±2h，产气者计为大肠菌群阳性管；没产气者为阴性管； 
注意事项： 
●在培养箱内拿出装有测试盒的托盘以及观察结果时，应平拿平放，以免由于测试盒的倾向而将阳性管产气窗内气泡排出，而影响结果. 
（附注：因食品卫生评价标准没变动，为使检测结果在进行评价时能转化为与之相对应的数值，固体样品只能采用双料型测试盒；液体样品可以采用双料型测试盒；也可以采用单料型测试盒；此仅供参考，各单位根据具体情况，灵活掌握）

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