一） 试剂盒名称：大肠菌群测试盒——国标九管发酵法 
   （二） 试剂盒采用的测定方法：GB/T4789.3-2003乳糖胆盐发酵法
   （三） 试剂盒的检验步骤：检验步骤与结果判断按GB/T4789.3-       2003中“7. 操作步骤”进行；
   （四） 试剂盒结构：分前后两排透明方管，每个方管里面有一个特别设计的产气窗，前排三个大方管相当于双料乳糖胆盐培养基，后排六个小方管相当于单料乳糖胆盐培养基，但成份已进一步浓缩；当加入稀释的待检样液或原液后，每管内均达到国标所要求的培养基浓度，大肠菌群发酵培养基产酸产气，培养基变黄，产气窗内产生气泡,结果观察一目了然; 试剂盒采用无菌包装，供用户一次性使用；
    （五）试剂盒的特点：  
    （1）对大肠菌群测定的方法仍然是GB/T4789.3-2003中乳糖胆盐发酵法；
    （2） 省去了繁杂的试剂配制、分装、消毒以及收尾工作，提高了工作效率，符合现代检验向快速、准确方向发展的要求；
    （3） 试剂盒占用空间小，减少玻璃器皿及培养箱的周转；
    （六）保存方法：常温下避光保存（*保存：0℃—8℃），有效期一年；
    （七）应用范围：食品、瓶装或桶装饮用（纯净）水；

大肠菌群测试盒操作步骤

准备测试盒
●.排气泡：将测试盒前后分别以大约45度角倾斜，必要时可轻轻
用力在桌面上敲击数下，以排除产气窗内气泡；并将样品编号填写在盒盖编号位置；
●.开口：将测试盒平放在桌面上，左手揭开活动盒盖，右手持经火焰消毒的开口器，冷却后在测试盒每管中间位置连续穿刺开口；

检样稀释
      以无菌操作将检样25mL（或g）放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内予置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样用均质器，以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。
     用1mL来菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。
另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。

乳糖发酵试验
     将待检样品稀释液（或液体饮料食品原液）接种于大肠菌群测试盒发酵管内，前排三大管内接种1：10的均匀稀释液（或液体饮料食品原液）10mL，后排共六管，其中三管接种1：10的均匀稀释（或液体饮料食品原液）1mL，另外三管接种1：100的稀释液（或液体饮料食品1：10的均匀稀释液）1mL，将接种好的测试盒放入托盘内，置36±1℃温箱内，培养24±2h后，如果培育基变黄，产气窗内有气泡者，为产酸产气，如所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则进行确正试验。

确证试验：两种方法任选其一
    1）复发酵分离鉴定：
    1.1）分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。
    1.2）证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏梁色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏梁色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性
    2）荧光法鉴定：
用接种针粘取产酸产气的发酵液接种于荧光鉴定管内，每管接种3针，将接种后的荧光鉴定管置于36±1℃培养箱内培养18h—24h。
将培养后的荧光鉴定管置于暗处，用波长366nm的紫外光灯照射，如显蓝色荧光，为大肠菌群阳性管；如未显蓝色荧光，则为大肠菌群阴性管。

结果报告：
   根据大肠菌群阳性管数，查MPN表，报告每100ml（g）食品中肠菌群MPN值
。
注意事项：
●在培育箱内拿出装有测试盒的托盘以及观察结果时，应平拿平放，以免由于测试盒的倾向而将阳性管产气窗内气泡排出，而影响结果.

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