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人抗呼吸道合胞病毒抗体（RSV）说明书定性
阅读：765 发布时间：2012-2-28人抗呼吸道合胞病毒抗体（RSV）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗呼吸道合胞病毒抗体（RSV）表
达。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗呼吸道合胞病毒抗体（RSV）表达。用纯化的抗
体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中抗呼吸道合胞病毒抗体（RSV）相结合，经洗
涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复
合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的
作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值） ，与 CUTOFF值
相比较，从而判定标本中人抗呼吸道合胞病毒抗体（RSV）的存在与否。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为抗呼吸道合胞病毒抗体（RSV）阴
性
阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为抗呼吸道合胞病毒抗体（RSV）阳
性 。
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的liu酸，使用时必须
注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6个月