联系电话
上海起发实验试剂有限公司
中级会员·16年
具体成交价以合同协议为准
- 联系人：
- 杨经理
- 电话：
- 021-50724187 021-50724961
- 手机：
- 15921799099
- 传真：
- 021-50724961
- 地址：
- 上海浦东川沙镇川沙路6619号上海起发实验试剂有限公司
- 个性化：
- www.qfbio.com
- 网址：
- www.qfbio.com
扫一扫访问手机商铺
产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | mg |
|---|
产品介绍
以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子，它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。
1.用于体外生物发光图像测定的实施方案
1.1在无菌水中制备100mM（100-200X）荧光素原液?；旌暇?。立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。
1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。
1.3从培养细胞中分离培养基。
1.4将荧光素工作溶液加入细胞中，并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。
2.用于体内生物发光图像测定的实施方案
2.1在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液，不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。
2.2过滤器通过0.2μm过滤器过滤灭菌溶液。立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。
2.3在动物体重150mg / kg（或10μL/ g荧光素储备溶液）成像10-15分钟腹膜内（i.p.）注射荧光素。
注意：应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究，以确定峰值信号时间。
3.荧光素报告分析分子测定的实施方案
3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 立即使用，或单独使用等分试样，并储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。
3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricine缓冲液，pH7.8。
3.3将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。
3.4根据制造商的说明，使用荧光素工作溶液的普利光度计。
3.5注入200μl荧光素工作溶液，无延迟，10秒积分时间。
注意事项
D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液，溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5（发生水解作用）或>7.5（发生消旋化作用，D型转化为L型）的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备，并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。
D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。
如果检测ATP，请戴上手套并使用无ATP容器，尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压灭菌水进行所有试剂制备。
