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Protein A Sepharose 4FF 產品使用說明書
——高IgG結合特異性 高流速 低蛋白A脫落
產品特點
特點
| 結合特異性強，基團脫落少 | 顆粒大小 | 50-160 μm |
基質 | 4%的交聯(lián)瓊脂糖凝膠 | 推薦流速 | 50-300cm/h |
配基 | 重組protein A | 使用溫度 | 常溫 |
配基密度 | 6mg重組蛋白A/ml | pH范圍 | 3-10 |
動態(tài)吸附載量 | 60mg人IgG/ml | 保存溫度 | +4~8℃ |
蛋白A殘留 | 小于3ng蛋白A/mg IgG | 保存液體 | 20%乙醇 |
Protein A Sepharose 4FF ，上海起福生物專業(yè)代理，：
產品介紹
Protein A sepharose介質是經(jīng)過我們公司長期開發(fā)，在公司生產的native protein A 的基礎上精致而成。通過Protein A Sepharose 4FF，可分離和純化多種哺乳動物不同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。本產品相對同類產品具有如下優(yōu)勢：
1、偶聯(lián)條件溫和，更好的保持了protein A的構象，所以抗體載量高，同體積的介質，相同規(guī)模的純化設備，相同體積介質，抗體的產量明顯高于用同類產品，大大的降低了抗體藥物生產成本。
2、非常穩(wěn)定，不易脫落，用其生產的抗體中protein A的殘留比同類產品的更少。
3、公司的Protein A 以及Protein A sepharose的生產都是在清潔車間生產，符合制藥企業(yè)生產需求。
4、公司生產的Protein A sepharose使用壽命長，常規(guī)條件下能夠重復使用100次以上。
使用說明
（1）緩沖液的準備：
平衡緩沖液：純化不同動物和不同亞型抗體時所用平衡緩沖液是不同的，部分參照如下： 抗體種類 | 平衡緩沖液成分 |
人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b | 10mM 磷酸鹽緩沖液，150mM NaCl，pH 7.21 |
人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3 | 50mM Tris-Cl，3M NaCl，pH7.8-8.5 |
（2）樣品的準備
樣品上柱前先用平衡緩沖液稀釋5至10倍，從而確保樣品液的成分和pH與平衡緩沖液相近。如果上樣體積過大，可以采取調節(jié)上樣液pH和鹽濃度的方式，使樣品的pH和電導與平衡液接近，使樣品中的緩沖體系與平衡緩沖液相同。
細胞培養(yǎng)液中大量的血清蛋白會對親和層析造成一定的干擾，去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體收率。
樣品在上柱前也需0.45μm微孔濾膜過濾。
（3）操作步驟
a） 填料裝柱后，用純水流洗至少3個柱管體積，以沖掉乙醇，再用平衡緩沖液流洗至少5個柱管體積來平衡柱子。
b） 將樣品上柱，上樣流速控制在60cm/h。
c） 平衡緩沖液再洗5-10個柱床體積，把UV洗至基線。
d） 洗脫緩沖液洗脫，收集洗脫峰，立即用中和緩沖液中和到中性。
e） 再生緩沖液流洗3-5個柱床體積。先后用純水、20%乙醇分別流洗3-5個柱床體積。柱子置于+4-8℃保存。
操作中如果沒有在線的蛋白監(jiān)測系統(tǒng)，洗脫峰時可以分階段
收集，zui后根據(jù)測定結果合并活性部分。
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