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Protein A Sepharose 4FF 產品使用說明書

2013-9-9  閱讀(4151)

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Protein A Sepharose 4FF 產品使用說明書

——高IgG結合特異性 高流速 低蛋白A脫落

產品特點

特點

 

結合特異性強,基團脫落少

顆粒大小

50-160 μm

基質

4%的交聯(lián)瓊脂糖凝膠

推薦流速

50-300cm/h

配基

重組protein A

使用溫度

常溫

配基密度

6mg重組蛋白A/ml

pH范圍

3-10

動態(tài)吸附載量

60mg人IgG/ml

保存溫度

+4~8℃

蛋白A殘留

小于3ng蛋白A/mg IgG

保存液體

20%乙醇

 

Protein A Sepharose 4FF ,上海起福生物專業(yè)代理,:

 產品介紹

Protein A sepharose介質是經(jīng)過我們公司長期開發(fā),在公司生產的native protein A 的基礎上精致而成。通過Protein A Sepharose 4FF,可分離和純化多種哺乳動物不同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。本產品相對同類產品具有如下優(yōu)勢:

1、偶聯(lián)條件溫和,更好的保持了protein A的構象,所以抗體載量高,同體積的介質,相同規(guī)模的純化設備,相同體積介質,抗體的產量明顯高于用同類產品,大大的降低了抗體藥物生產成本。

2、非常穩(wěn)定,不易脫落,用其生產的抗體中protein A的殘留比同類產品的更少。

3、公司的Protein A 以及Protein A sepharose的生產都是在清潔車間生產,符合制藥企業(yè)生產需求。

4、公司生產的Protein A sepharose使用壽命長,常規(guī)條件下能夠重復使用100次以上。

 

 

使用說明

(1)緩沖液的準備:

平衡緩沖液:純化不同動物和不同亞型抗體時所用平衡緩沖液是不同的,部分參照如下: 抗體種類

平衡緩沖液成分

人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b

10mM 磷酸鹽緩沖液,150mM NaCl,pH 7.21

人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3

50mM Tris-Cl,3M NaCl,pH7.8-8.5

 

(2)樣品的準備

樣品上柱前先用平衡緩沖液稀釋5至10倍,從而確保樣品液的成分和pH與平衡緩沖液相近。如果上樣體積過大,可以采取調節(jié)上樣液pH和鹽濃度的方式,使樣品的pH和電導與平衡液接近,使樣品中的緩沖體系與平衡緩沖液相同。

細胞培養(yǎng)液中大量的血清蛋白會對親和層析造成一定的干擾,去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體收率。

樣品在上柱前也需0.45μm微孔濾膜過濾。

(3)操作步驟

a) 填料裝柱后,用純水流洗至少3個柱管體積,以沖掉乙醇,再用平衡緩沖液流洗至少5個柱管體積來平衡柱子。

b) 將樣品上柱,上樣流速控制在60cm/h。

c) 平衡緩沖液再洗5-10個柱床體積,把UV洗至基線。

d) 洗脫緩沖液洗脫,收集洗脫峰,立即用中和緩沖液中和到中性。

e) 再生緩沖液流洗3-5個柱床體積。先后用純水、20%乙醇分別流洗3-5個柱床體積。柱子置于+4-8℃保存。

操作中如果沒有在線的蛋白監(jiān)測系統(tǒng),洗脫峰時可以分階段

收集,zui后根據(jù)測定結果合并活性部分。

上海起福生物科技有限公司

:楊建輝

辦公:
*8006

:
:http://www.qfbio.com/
地址:上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室

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