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PEI轉(zhuǎn)染手冊

2011-12-13  閱讀(79779)

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                                         PEI轉(zhuǎn)染手冊

 

轉(zhuǎn)染操作流程:
 
  1、細(xì)胞傳代:

轉(zhuǎn)染前24h內(nèi)分離293T細(xì)胞至含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基 中進(jìn)行傳代培養(yǎng),接種密度如下:
         6孔板:0.5x106細(xì)胞
         10cm培養(yǎng)皿:4.0x106細(xì)胞
         15cm培養(yǎng)皿:9.0x106細(xì)胞

2、轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫。

2.1質(zhì)粒DNA的稀釋

在無菌試管中,用無血清的DMEM W / O酚紅培養(yǎng)基(濃度為10%)稀釋質(zhì)粒DNA(ug)。病毒包裝體(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重組質(zhì)粒DNA的稀釋比例分別為4:2:1。
       

6孔板:200ul+3ug的DNA
        10cm培養(yǎng)皿:1ml+7-8ug的DNA
        15cm培養(yǎng)皿:2ml+11-12ug的DNA

   2.2 轉(zhuǎn)染復(fù)合體形成

將PEI(1ug/uL)加入已稀釋的總DNA中,PEI與DNA(ug)的混合比率為3:1。加入后立即渦旋混合。
      

 6孔板:9ul PEI復(fù)合體(1ug/ul)=9ug
        10cm培養(yǎng)皿:21ul PEI復(fù)合體(1ug/ul)=21ug
        15cm培養(yǎng)皿:33ul PEI復(fù)合體(1ug/ul)=33ug
將添加到細(xì)胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鐘。


4、收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞

轉(zhuǎn)染后48小時(shí)內(nèi)收獲轉(zhuǎn)染細(xì)胞/或病毒上清。
 
試劑的配制:
PEI(1ug/ul)
1、將無內(nèi)毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI,冷卻到室溫。
2、調(diào)整pH值至7.0,用0.22um的濾器過濾消毒,分裝后儲存在-20℃。工作液可保持在4℃

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線性聚乙烯亞胺 分子量25000

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友情提醒: BIOHIB的線性聚乙烯亞胺78pei25000
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可完美替代 Polysciences公司貨號為 24765-1 Polyethylenimine, Linear (MW 40,000)的產(chǎn)品

 

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