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3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA試劑盒實驗原理
最近更新時間：2017-11-23
提 供 商：上海研生實業(yè)有限公司資料大?。?/span>117.7KB
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3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定相關(guān)液體樣本中3-硝基酪氨酸(3-NT)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中3-硝基酪氨酸(3-NT)水平。用純化的3-硝基酪氨酸(3-NT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入3-硝基酪氨酸(3-NT)，再與HRP標記的3-硝基酪氨酸(3-NT)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的3-硝基酪氨酸(3-NT)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中3-硝基酪氨酸(3-NT)濃度。
試劑盒組成
1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品（240 nmol/L）
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個
3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA試劑盒標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120 nmol/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
60 nmol/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
30 nmol/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
15 nmol/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
7.5 nmol/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA試劑盒測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。