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人咽鱗癌細胞 FaDu細胞實驗操作步驟
點擊次數(shù)：800 發(fā)布時間：2024-10-5
在成功獲取并培養(yǎng)了人咽鱗癌細胞FaDu細胞后，接下來進入實驗操作的核心階段。首先，我們需要對細胞進行傳代處理，以確保實驗所需細胞量的充足及細胞活力的維持。具體操作如下：
1. **準備培養(yǎng)基與試劑**：確保新鮮的培養(yǎng)基（如RPMI-1640培養(yǎng)基）已預(yù)熱至37℃，并含有10%胎牛血清及必要的抗生素（如青霉素和鏈霉素），以防污染。同時，準備胰蛋白酶-EDTA溶液用于細胞消化。
2. **細胞消化**：在顯微鏡下觀察FaDu細胞生長情況，當細胞密度達到約80%-90%時，吸去舊培養(yǎng)基，用無菌PBS輕輕洗滌細胞兩次，以去除殘留的培養(yǎng)基和死細胞。隨后，加入適量預(yù)溫的胰蛋白酶-EDTA溶液，覆蓋細胞表面，放入37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中孵育約3-5分鐘，直至細胞間隙增大，形態(tài)變圓。
3. **細胞收集與重懸**：輕輕拍打培養(yǎng)皿底部，使細胞脫落，加入等體積的新鮮培養(yǎng)基終止胰酶作用，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，確保細胞充分分散成單個。
4. **細胞計數(shù)與接種**：取少量細胞懸液進行計數(shù)，根據(jù)實驗需求調(diào)整細胞密度后，將適量的細胞懸液接種到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板中，輕輕搖晃使細胞均勻分布，然后放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
5. **后續(xù)處理**：根據(jù)實驗?zāi)康?，F(xiàn)aDu細胞可用于多種實驗，如藥物敏感性測試、基因編輯、信號通路研究等。在接下來的步驟中，可能需要對細胞進行轉(zhuǎn)染、加藥處理或收集細胞進行分子生物學分析。每一步操作都需嚴格遵循無菌原則，確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。
通過以上步驟，我們成功完成了FaDu細胞的傳代與基本處理，為后續(xù)深入研究奠定了堅實的基礎(chǔ)。