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杭州漢澤儀器有限公司
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waters液相色譜儀測定大豆胚軸中單糖鏈大豆皂甙的含量

時間:2012/9/26閱讀:5244
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  一、waters液相色譜儀和試劑
檢測單元為Waters液相色譜儀是非常靈活的HPLC系統(tǒng),包WatersTM 717 plus自動進樣器;Waters 600E控 制單元;WatersTM 805數(shù)據(jù) 處理機和 Waters 2410差示折光儀。液相色譜用試劑為色譜純。
二、色譜條件
色譜柱為 ODS-AM一303柱 (YMC,4.6 mm×250 mm,5肚m),柱溫 40℃,流動相為含 0.1  三氟已酸的乙腈 一水 (40:60,v/v),流速1 mL rain~,高純氦氣脫氣 ,進樣量 10 L,分析時間為 45 rain。
三、標樣配制
大豆皂甙標準品,實驗室自行制備,通過 IR、FAS-MS、 H—NMR和”C_NMR鑒定 ,液相色譜分析為單一峰。稱取Ba和Bb、Bd和Be、ag和Dg標準品 ,加甲醇溶解定容至 10 mL,分別配成濃度為0.561和 0.588、0.396和 0.503、0.344和 0.406 mg
mL叫的溶液,作為對照品溶液。分別吸取標準品液10 L,供 HPLC分析。
四、試樣制備
大豆冷凍干燥后剝離胚軸 。將 3 kg大豆胚軸研磨粉碎 ,用15 L 50甲醇常溫提取 ,提取液經(jīng)噴霧干燥得粗粉 562 g。將粗粉用等體積正丁醇一水溶液萃取,取正丁醇層,經(jīng)減壓蒸餾、冷凍干燥,得總糖甙 223 g。
五、測定
稱取總糖甙 0.1 g,用甲醇定容至50 mL,以Milipore FH  0.5肚m過濾膜過濾后作為樣品供試液。分別吸取供試液 1O L,供 HPLC分析。
六、結論
建立了大豆胚軸中單糖鏈大豆皂甙的液相色譜測定方法。采用差示折光檢測法,結果峰面積值和進樣量之間呈良好的線性關系 ,用于單糖鏈大豆皂甙的分析中優(yōu)于紫外檢測法。所建立的檢測方法靈敏度、重現(xiàn)性均能滿足一般分析要求 ,可用于大豆皂甙樣品中其它大豆皂甙的分析中。

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