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北京華科盛精細(xì)化工產(chǎn)品貿(mào)易有限公司

電泳緩沖液物性特點及作用

時間:2023-6-22閱讀:1374
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北京華科盛精細(xì)化工產(chǎn)品貿(mào)易有限公司生產(chǎn)銷售電泳緩沖液
電泳緩沖液是核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳系統(tǒng)的一個重要組成, 是電泳場中的導(dǎo)體,也是維持電泳系統(tǒng)恒定 pH值的必要條件。其成分及其離子強度影 響物質(zhì)的電泳遷移率,應(yīng)避免與被分離的樣 品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而改變樣品的理化性質(zhì)或使 其喪失生物活性。電泳緩沖液中的EDTA 可螯合Mg離子等二價陽離子,防止電泳時激 活DNA酶及Mg離子與核酸生成沉淀。 [1] 
中文名電泳緩沖液釋    義進行分子電泳時所使用的緩沖溶液作    用穩(wěn)定體系酸堿度常見緩沖液TAE、TBE、TPE和MOPS等隸    屬核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳系統(tǒng)特    點使用廣泛。

作用


緩沖液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH。電泳時陽極與陰極都會發(fā)生電解反應(yīng),陽極發(fā)生的是氧化反應(yīng)(4OH--4e->2H2O+O2),陰極發(fā)生的是還原反應(yīng)(4H++4e->2H2),長時間的電泳將使陽極變酸,陰極變堿。一個好的緩沖系統(tǒng)應(yīng)有較強的緩沖能力,使溶液兩極的pH保持基本不變。
電泳緩沖液的另一個作用是使溶液具有一定的導(dǎo)電性,以利于DNA分子的遷移,例如,一般電泳緩沖液中應(yīng)含有0.01-0.04mol/L的Na+離子,Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢;太高時就會造成過大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。
電泳緩沖液還有一個組分是EDTA,加入濃度為1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等離子,防止電泳時激活 DNA酶,此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。

特點


TAE是使用泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量(TBE中電泳時測出的相對分子質(zhì)量會大于實際分子質(zhì)量),且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%,電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果,此外,回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。TAE的缺點是緩沖容量小,長時間電泳(如過夜)不可選用,除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。
TBE的特點是緩沖能力強,長時間電泳時可選用TBE,并且當(dāng)用于電泳小于1kb的片段時分離效果更好。TBE用于瓊脂糖凝膠時易造成高電滲作用,并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價結(jié)合的四羥基酸鹽復(fù)合物而使DNA片段的回收率降低,所以不宜在回收電泳中使用。
TPE的緩沖能力也較強,但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過程中析出,所以也不宜在回收DNA片段的電泳中使用。


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