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研域(上海)化學試劑有限公司

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血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠

時間:2016/1/11閱讀:928
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血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中水平。用純化的大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ),再與HRP標記的肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)濃度。

血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

標準品(80μg/L)

0.5ml×1瓶

3

酶標包被板

12孔×8條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張 

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

3.組織處理:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

操作步驟

  1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

40μg/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

20μg/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

10μg/L

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

5μg/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.5μg/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

  1. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
  3. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  6. 溫育:操作同3。
  7. 洗滌:操作同5。
  8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn))。
  10. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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