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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

人胎盤cDNA說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2015-5-14閱讀:1680
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人胎盤cDNA說(shuō)明書(shū)

 

 

Human Placenta cDNA

人胎盤  cDNA

 

Cat. No.   YJ0568

保存:- 2 0 ℃ ,  避 免  反  復(fù) 凍  融

 

組分說(shuō)明

 

 

                Cat. No.                 YJ0568

                Volume             100  μl (20 reaction)

 

  產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

       本產(chǎn)品是以人胎盤組織 RNA 為模板,oligodt 以及 Random 為引物,  用上海研謹(jǐn)生物的高靈敏度的逆轉(zhuǎn)錄酶(YJ0740)

   反轉(zhuǎn)錄得到的 PCR 即用型 cDNA,可用于 PCR  實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照。

 

  純度

 

      OD260/280≈1.8

 

  操作步驟

 

       以下舉例為常規(guī) PCR  反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小丌同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)

 

  和優(yōu)化。

 

  1.  PCR反應(yīng)體系:

 

   試劑                     50  μl體系                             終濃度

10×Taq PCR Buffer with Mg 2+      5  μl                              1×

dNTP Mix,2.5 mM each             4  μl                    200  μM each

  Forward Primer,10  μM           2μl                     0.4  μM

  Reverse Primer,10  μM             2  μl                  0.4  μM

  Human Placenta cDNA                 5  μl

  Taq DNA Polymerase,2.5 U/μl           0.5  μl

   RNase-Free Water                     up to 50  μl

 

      注意:1)引物濃度請(qǐng)以終濃度0.1-1.0  μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率丌高的情況下,可提高引物的濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),可降 低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

 

           2)鎂離子濃度請(qǐng)以終濃度1.5-3 mM作為設(shè)定范圍的參考。本產(chǎn)品的10×PCR Buffer中已經(jīng)含有15 mM鎂離子,可根據(jù)丌同的引物對(duì)和模板來(lái)調(diào)節(jié)鎂離子濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

 

  2.  將混合好的液體進(jìn)行PCR反應(yīng)。

 

  3.  結(jié)果檢測(cè):反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物,加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

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