SPRabbit&MouseHRPKit(DAB)

     兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒(帶DAB顯色液)

     目錄號：K2069

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 組分說明

 Cat.No.                        K2069     K2069A

KitSize                          3ml       18ml

內源性過氧化物酶封閉液（試劑1，白色液體）                               3ml       18ml

封閉用正常羊血清工作液（試劑2，白色液體）                               3ml       18ml

生物W素標記羊抗兔/鼠二抗工作液（試劑3，黃色液體）            3ml       18ml

 HRP標記的鏈霉親和素（試劑4，紅色液體）                                  3ml       18ml

DAB-A液（20×）                                                                            250μl     1ml

DAB-B液（1×）                                                                              5ml       20ml

*本試劑盒僅適用于一抗為兔源或鼠源抗體的IHC實驗

     產(chǎn)品簡介

    本試劑盒根據(jù)生物+#素(Biotin)與鏈霉親和素(Streptavidin)具有很強親和力的原理設計。在兔源或鼠源的一抗與相應的靶抗原結合后，本試劑盒中的生物素化抗·兔/鼠通用型二抗與一抗特異結合；二抗上標記的生物W素與標記了過氧化物酶（HRP）的鏈霉親和素結合，形成抗原～特異性一抗～生物W素化的二抗～HRP標記的鏈霉親和素復合物。HRP可以催化底物顯色，從而推斷待檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物W素化二抗、SA-HRP，均采用優(yōu)化的標記和純化技術，使得其染色有更高靈敏度和更低的背景，適合于檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織切片，以及冰凍切片、細胞爬片、新鮮制備的血涂片等。

兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒適合與研謹生物即用型或濃縮型抗體配套使用。

     注意事項

     1.  以每張切片加入1滴（約50μl）計算，3ml可做60張切片，18ml可做360張切片。

     2.  對于內源性生物W素含量比較豐富的組織，使用本試劑盒時最好用內源性生物W素阻斷劑進行封閉。

     3.  DAB工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好的工作液2-8°C避光1小時內有效。

   4. 實驗過程中避免組織片干燥，因此各步孵育時工作液用量必需充足，保證*覆蓋組織樣本，且盡量在濕盒中進行孵育。

    5.為獲得最佳實驗結果，請務必優(yōu)化實驗條件及試劑用量。

     6.  DAB為可疑致癌物，使用時請采取必要的防護措施。

     7.  本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體反應或人體治療。

使用方法

1.  常規(guī)處理欲檢測的石蠟或冰凍組織切片或細胞爬片等樣本。

     1）組織切片或細胞爬片染色前處理：

    a.石蠟切片

         脫蠟水化：60oC烤片1小時，二甲苯脫蠟二次，每次5分鐘；再依次浸入梯度乙醇（無水乙醇－無水乙醇－95%

         －85%－75%乙醇）和蒸餾水中各5分鐘水化。

    b.冰凍切片和細胞爬片

         切片（或爬片）浸于0.01MpH7.4PBS洗滌3次×5分鐘。然后用0.1%TritonX-100覆蓋組織（或細胞）浸潤15分鐘，0.01MpH7.4PBS洗滌2次×5分鐘。

2）石蠟切片的抗原修復：絕大大多數(shù)情況下，石蠟組織切片用檸檬酸緩沖液高壓修復都是適合的。修復工作液配制：1L去離子水中加入10ml檸檬酸緩沖液（IHC抗原修復液,100×)（Cat#：K0128），混勻即可。修復過程：修復液加入高壓鍋內，待修復切片浸于修復液中（必需沒過組織），蓋上壓力鍋蓋，加熱至均勻噴汽，從噴汽開始計時，1~2分鐘后壓力鍋離開熱源，自然冷卻至室溫，取出切片，蒸餾水淋洗后，再用PBS（0.01MpH7.4）漂洗2次，每次3分鐘。

2.滴加適量試劑1（內源性過氧化物酶封閉液），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

3.滴加適量試劑2（封閉用正常羊血清工作液），室溫孵育10分鐘，甩干。

4.滴加適量一抗工作液（商品化即用型抗體或適當比例稀釋的濃縮抗體），按實驗要求孵育，然后PBS充分淋洗。

5.滴加適量試劑3（生物W素標記羊抗兔/鼠二抗工作液），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

6.滴加適量試劑4（HRP標記的鏈霉親和素），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

7.DAB顯色工作液配制：根據(jù)需要量，將試劑A和試劑B以1：19的體積比混勻后即為DAB顯色工作液。也可選擇每毫升試劑B中滴加1滴（約50μl）試劑A，混勻即可。

8.顯色：加適量的DAB顯色工作液于需要顯色的組織切片或細胞爬片上即可顯色，顯色時間一般為1~5分鐘。顯微鏡下觀察控制顯色時間，當達到最佳顯色效果后，自來水沖洗終止顯色。顯色后的切片經(jīng)復染、脫水透明，封片后可長期保存。

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