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草酸含量检测试剂盒说明书

微量法

货号: BC4365

规格:100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入3mL蒸馏水溶解后待用；

2、 标准品：临用前加入792µL蒸馏水配制成100 µmol/mL草酸标准溶液；

产品说明：

草酸是一种二元羧酸，广泛存在于植物界中，且在不同领域有着不同的作用：在医药、印染、塑料等工业生产中，草酸可用作制药原料、络合剂、漂白剂、沉淀剂以及还原剂等；从食品角度看，长期食用草酸含量高的蔬菜，容易引发关节炎、低血钙、膀胱结石和肾结石等疾病，而被认为是矿物元素的拮抗物。

Fe³⁺在pH为2的条件下可以与磺基水杨酸生成紫色络合物，在510 nm处有特征吸收峰。草酸及草酸根可以使Fe³⁺与磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅，且Fe³⁺与磺基水杨酸络合物的吸光度随着草酸量的增加而降低，据此可由降低的吸光值计算出样本中草酸的含量。

技术指标：

低检出限：0.1601 μmol/mL

线性范围：0.1875-18 μmol/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）:蒸馏水体积（mL）为1:5~10的比例（建议称取约0.1 g，加入1 mL蒸馏水）充分匀浆，然后加入少许试剂四（约3-5mg），震荡混匀后置于75℃水浴锅脱色30 min，期间摇晃2-3次，脱色后常温3000r/min离心15 min，取上清置于冰上待测（若组织沉淀与试剂四不能一次性离心去除时，建议将上清多离心几次；若一

次脱色不全时，建议重复脱色至溶液呈无色或略呈乳白色）。

二、测定步驟

1、 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至510 nm，蒸馏水调零。

2、 将100 µmol/mL的草酸标准液用蒸馏水稀释为18、15、12、6、3、1.5、0.75、0.375 µmol/mL的标准溶液备用。

3、 操作表 (在1.5 mL离心管/96孔板中操作) ：

注意：如果检测样本量大，可以根据样本所需按照试剂一:试剂二:试剂三=2:15:1（v:v:v）的比例配制成工作液现配现用，加样体系为180 µL工作液，20 µL样本（蒸馏水或标准溶液）。

三、草酸含量计算

1、 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y= kx+b，将ΔA带入方程得到x（µmol/mL）。

2、 草酸含量的计算：

草酸含量（mg/g质量）= x×V提取×M×10^-3÷W=0.09x÷W

V提取：加入的蒸馏水体积，1mL；W：样本质量，g；M：草酸分子质量90.04；10^-3：单位换算系数，1 µg=10^-3 mg。

注意事项：

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2. 如将试剂一、试剂二与试剂三配成工作液使用时，按照配制比例根据样本量所需现配现用，不得一次性配完待用。

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