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二胺氧化酶（DAO）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1285
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
1. 标准品：临用前取102 μL加入898μL蒸馏水得到1mol/L（即1000μmol/mL）的过氧化*溶液，2-8℃保存4周。
2. 0.5μmol/mL标准溶液的配制：取20μL 1000μmol/mL 标准液和980μL蒸馏水混合配成20μmol/mL 标准液；再取25μL 20μmol/mL 标准液和975μL蒸馏水混合配成0.5μmol/mL标准溶液备用。
产品说明：
DAO（EC1.4.3.6）广泛存在于动物（肠黏膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白质合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损程度。
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，H₂O₂氧化亚铁*中的Fe²⁺生成Fe³⁺，Fe³⁺进一步与4-氨基安*比林和酚反应生成红色醌类化合物，在505nm处有特征吸收峰，通过测定505nm处的吸光值来计算DAO的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

1. 称取0.1009g竹叶样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，10000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测，之后按照测定步骤，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=1.0176-0.4116=0.6060，ΔA标准=A标准管

-A空白管=0.3557-0.0767=0.279；按样本质量计算酶活得：
DAO活性 (U/g 质量) = 0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =10.763 U/g 质量

1. 称取0.1000g十二指肠样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，10000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测，之后按照测定步骤，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.2336-0.1803=0.0533，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.3557-0.0767=0.279；按样本质量计算酶活得：

DAO活性 (U/g 质量)= 0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =0.955 U/g 质量
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